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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商:
EnkiLife
- 服务名称:
TSA多重免疫荧光染色技术服务
TSA技术服务
技术介绍
酪酰胺信号放大(TSA)是一种基于辣根过氧化酶(HRP)的催化活性对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法。原理为酪胺Tyramide的过氧化物酶反应(已标记荧光的酪胺在HRP催化H2O2下形成共价键结合位点)产生的大量酶促产物与目标蛋白的酪氨酸残基共价结合,从而使目标蛋白标记上特异的荧光。
实验原理

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服务项目
| 分类 | 服务项目 | 备注 |
|---|---|---|
| IF荧光染色 | 免疫荧光单标 | 不含一抗,含二抗(兔/小鼠/大鼠)、DAPI |
| 免疫荧光双标 | 常规为不同种属一抗分别标记;不含一抗,含二抗(兔/小鼠/大鼠)、DAPI | |
| 免疫荧光三标 | 不含一抗,含二抗(兔/小鼠/大鼠)、DAPI | |
| 免疫荧光四标 | 不含一抗,含二抗(兔/小鼠/大鼠)、DAPI; 需要提供多余白片做单标预实验。例如:10例样本做5标,其中目的片子提供10张,另选择样本A提供5-10张白片,分别做5色的单标,预实验成功再进行正式实验 |
|
| 免疫荧光五标 | ||
| 荧光全景扫描 | 荧光单标 双色全景扫描 | 提供读片软件及原始相关文件,荧光扫描波长范围 |
| 荧光双标 3色全景扫描 | ||
| 荧光三标 4色全景扫描 | ||
| 荧光四标 5色全景扫描 | ||
| 荧光五标 6色全景扫描 | ||
| 荧光六标 7色全景扫描 | ||
| 超多标染色 | 免疫荧光6标+扫描 | 实验检测+图像采集 |
| 免疫荧光7标+扫描 | ||
| 免疫荧光8标+扫描 | ||
| 免疫荧光9标+扫描 | ||
| 免疫荧光10标以上 | ||
| 病理分析(5标及以下) | 免疫组化(阳性细胞数量) | 全景扫描或者截图3张 包含:阳性细胞比率、阳性细胞密度、平均光密度值、H-Score。一次分析即可获取该指标阳性细胞数量相关参数的四个数值,以上相关参数均可用于评价阳性强弱多少。 |
| 免疫组化(阳性面积) | 全景扫描或者截图3张 包含:H-score、平均光密度值、阳性面积比、阳性面积密度。一次分析即可获取该指标阳性细胞数量相关参数的四个数值,以上相关参数均可用于评价阳性强弱多少。 |
|
| 免疫荧光(阳性细胞数量) | 全景扫描或者截图3张 按靶标数量,累计计费。包含:阳性细胞比率、阳性细胞密度、平均光密度值。一次分析即可获取该指标阳性细胞数量相关参数的三个数值。以上相关参数均可用于评价阳性强弱多少。 |
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| 免疫荧光(共定位计数) | 全景扫描或者截图3张 可分析每两个指标或多个指标的共定位阳性面积相关参数,可根据需求选择需要共定位分析的指标组合,累计计费。 |
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| 免疫荧光(临近度分析) | 全景扫描或者截图3张 统计A细胞指定范围内,B细胞分布数量;按每张图片分析的组合数量,累计计费 |
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| 免疫荧光(细胞密度分析) | 全景扫描或者截图3张 从对象数据中测量特定半径内选定的细胞密度,累计计费 |
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| 免疫荧光(浸润分析) | 全景扫描或者截图3张 统计指定的免疫细胞在肿瘤边界内外一定范围内的分布数量;按每张图片分析的免疫细胞类型数量,累计计费,仅针对炎症指标(例:F4/80,CD68等) |
案例分析


检测样本:大鼠肾脏
AQP4:在内髓集合管和皮质/外髓集合管的主细胞可见阳性染色;
CD31:广泛用于标记血管内皮,肾小球毛细血管内皮、各级血管内皮中均有表达;
TGFβ1:在高血压、纤维化模型中表达显著上调,肾小球上皮细胞(主要是足细胞)、间质成纤维细胞中表达;
Zo-1:作为紧密连接支架蛋白,维持肾小球滤过屏障和肾小管极性;
Collagen I:在纤维化或硬化模型中大量沉积于间质及肾小球。

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文献和实验实验流程:多靶点免疫荧光染色的实验操作与普通单标记免疫组化流程相似。试剂盒中的荧光染料可以在HRP酶的作用下将信号共价结合到抗原上,随后即可衔接下一轮单标染色,直至全部标记完成,即可复染DAPI后封片观察。1.脱蜡水合:1)新鲜二甲苯浸片10min,重复3次。2)梯度乙醇浸片,100% 5min;95% 5min;70% 2min。3)灭菌水洗片1min,重复3次。4)10%中性福尔马林浸片10min,灭菌水洗片1min,重复3次。2.微波修复:1)将脱蜡水合后的玻片置于修复杯中,用抗原
所谓工欲善其事必先利其器,做实验也是一样的道理。做免疫组织化学染色,抗体信号弱,再怎么重复也达不到好的效果,不如试试 TSA 酪胺信号放大技术。该技术是一类利用辣根过氧化酶(HRP)对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法,可有效放大信号 100-800 倍。该技术可与高性能染料 Alexa Fluor、传统荧光染料和比色检测系统相兼容。上海臻和生物科技有限公司基于 TSA 酪胺信号放大技术开发了一系列自主品牌 EU-BIO 试剂盒,包括不同荧光标记、针对不同一抗种属来源,以及双
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试剂、Ventana 自动染色仪、Vectra Polaris 多光谱成像仪、InForm 光谱拆分及组织病理定量分析软件为主要研究方法, 获得了以下主要结果:I 较高密度的 TLS 的高密度与 CD8+ T 淋巴细胞肿瘤浸润密度相关,是细胞杀伤性免疫反应激活的特征。I B 细胞和 TLS 的成熟可预测接受免疫检查点抑制剂治疗的患者的预后。I 泛肿瘤/“肿瘤不可知”生物标志物:TLS 在 11 种不同肿瘤类型中的存在与 PDL-1 轴阻断功效相关。 同时使用双色免疫组化和 Opal 多重免疫荧光染色方案,证实
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