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428018-200ML密理博十二烷基硫酸钠溶液20% in H₂O 200ml Millipore
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文献和实验葡萄糖溶液 成分:葡萄糖 200 g 加蒸馏水至 1000 mL 配制:加少量蒸馏水加温溶解葡萄糖,再加蒸馏水至 1000 mL。于 0.068 MPa 下高压灭菌 20 min。储于 4 ℃ 冰箱。6.5 底层琼脂培养基 成分:琼脂粉 7.5 g 蒸馏水 480 mL V-B培养基E 10 mL 20%葡萄糖溶液 10 mL 配制:首先将前两种成分于 0.103 MPa 下高压灭菌 30 min后,再加
:活检组织移入15mL离心管,加入2mMEDTA溶液,低速旋转孵育1h。 4.沉降弃上清:静置10s,弃去底部组织沉淀上方全部上清。 5.解离收集隐窝:加入1mL解离缓冲液转移至2mL冻存管,剧烈手摇;静置30s,吸取含隐窝上清至15mL离心管;重复吹打收集2~3次,保证隐窝完全回收。 6.中和终止:收集液加入5mLDMEM(含1%青链霉素、20%FBS) 7.离心富集:4℃、400g离心8min,弃上清。 8.洗涤过滤:2mLDMEM重悬沉淀洗涤1次,70μm细胞筛过滤去除大块组织残渣。 9.二次
于37℃培养12-16h。 1.2鉴定和挑选含重组质粒的菌落 1.用无菌牙签挑取单菌落,接种到10ml含氨苄青霉素的LB培养液的离心管中,于37℃,200转/分培养2h,取1ml之一Eppendorf离心管,加50μl10mmol/LEDTA(pH8.0)。 2.加入50μl新配置的0.2mol/LNaOH、0.5%SDS、20%蔗糖溶液后,振荡30秒。 3.在70℃温育5min,然后冷却到室温。 4.加1.5μ14mol/LKCl
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