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- 2026年04月15日
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敲低稳转株构建
服务介绍
我们提供专业的shRNA敲低稳转细胞株构建服务，通过高效的慢病毒递送系统，将靶向目的基因的短发夹RNA（shRNA）稳定整合至细胞基因组，实现对特定基因表达的长效、特异性抑制。获得的稳转细胞株是研究基因功能缺失、探索信号通路、进行遗传筛选及长期表型分析的理想工具。我们拥有严格的生物信息学设计流程与实验质控体系，确保为您交付敲低效率高、性状稳定的细胞模型。
服务流程（清晰规范，全程可控）：
靶点设计与载体构建：基于您指定的基因信息，我们运用专业算法设计并筛选出3条高特异性和高活性的shRNA序列，并克隆至慢病毒载体。
病毒包装与滴度测定：使用三质粒系统在HEK293T细胞中包装慢病毒，并进行超速离心浓缩，测定并交付具有感染活性的病毒滴度报告。
细胞转导与稳转筛选：以优化的感染复数（MOI）感染您的目标细胞，随后使用合适的抗生素（如嘌呤霉素）进行持续筛选，获得稳定整合shRNA序列的细胞池。
细胞扩增与冻存：对筛选后的细胞进行扩增培养，完成支原体检测等质量控制后，进行冻存保种。
实验结果
我们承诺为客户提供全面、清晰的实验数据报告，包括：
过程与质控数据：提供shRNA序列信息、病毒滴度测定结果及细胞筛选过程中的状态记录。
敲低效率验证：通过qPCR检测，提供mRNA水平敲低效率（保证可达70%以上）的定量数据；如载体携带荧光标签，提供细胞荧光图/荧光检测数据。
交付物：最终交付复苏的稳转细胞株一瓶（T25瓶）或冻存的稳转细胞株（2支）、对照细胞株及完整的实验报告，确保您能立即用于后续研究。
我们致力于以精湛的技术和可靠的交付，为您的基础研究与药物开发提供强有力的细胞模型支持。
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文献和实验，无法达到持续表达外源基因的目的。一般用转染试剂进行质粒转染，多是瞬时转染。非常好，你能区分什么时候需要构建稳转株吗？细胞：需要构建稳转株的，有这些类型：1. 长期在目的细胞中研究基因功能；2. 部分蛋白半衰期极长，瞬时 RNA 只能干扰表达，无法去除已经表达的目的蛋白，想要实现更好的基因干扰效果；3. 想要实验更精准，筛选拷贝数适量的细胞进行实验研究；4. 需要用诱导表达系统的，主要是一些致死基因或者是需要时空表达的；5. 需要用细胞做动物实验的，比如裸鼠成瘤等。以下实验就不需要构建稳定
细胞，后面作者又证明了雷公藤红素和 19-048 诱导的 ROS 升高会导致结直肠癌细胞的周期停滞和凋亡。 图 3. 雷公藤红素衍生物 19-048 具有更高的效力和特异性 为了验证 PRDX1 是雷公藤红素和 19-048 在结直肠癌细胞中诱导细胞周期停滞和凋亡的主要靶蛋白，作者在 SW620 细胞中通过 CRISPR-Cas9 系统构建了 PRDX1 敲低细胞系（SW620-gPRDX1），用阴性 sgRNA（SW620-gNS）作为对照，与对照相比，SW620-gPRDX1 细胞中 ROS 积累
、 miRNA靶基因的验证与miRNA靶基因 的预测方法相比，对miRNA靶基因进行实验验证的方法并不多，目前还没有一个快速、简便、高通量的鉴定方法。最直接的鉴定方法是， 利用荧光定量PCR及Westernblot方法分别检测转染或敲低miRNA后细胞中mRNA水平及蛋白水平的变化，从而确定miRNA与靶基因的对应关系。这种方法能够直接鉴定出miRNA的靶基因， 准确度高但不能鉴定miRNA的靶位点。转染或敲低miRNA：方式主要有两种，一种是构建miRNA过表达载体的稳定表达系统，一种是人工合成miRNA
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