如何分析外泌体纯化质量？

外泌体（Exosomes）是一类直径约30–150 nm、由多种细胞分泌的细胞外囊泡，广泛参与细胞间通讯与病理调控，特别在肿瘤、神经退行性疾病和免疫学研究中具有重要价值。然而，不同的提取方法如超速离心、聚合物沉淀或尺寸排阻层析，常常带来蛋白杂质、脂蛋白或非外泌体EVs共存，可能严重干扰下游分析的准确性与可重复性。因此，系统、全面地分析外泌体纯化质量，是开展高可信度组学研究、功能验证及生物标志物开发的前提。

 

一、外泌体纯化质量的四大核心评价维度

1、形态学评估：透射电子显微镜（TEM）

TEM 是确认外泌体典型形态的金标准，可通过负染方式直观观察其“杯状”或“碟状”结构，并初步判断样品中是否存在膜结构破损、细胞碎片或蛋白聚集物。

（1）优点：形态直观，确认外泌体结构可靠

（2）局限：样本通量低，需与其他方法联合使用

 

2、粒径与颗粒浓度：纳米颗粒追踪分析（NTA）

NTA（如NanoSight）可实时监测颗粒布朗运动，从而计算出粒径分布和颗粒浓度，是当前评估外泌体纯化质量的关键技术之一。

（1）理想结果：

 

• 粒径范围集中在30–150 nm
• 单峰或狭窄分布表明样本异质性较低
• 颗粒浓度可用于评估回收效率

 

（2）建议：与TEM联合验证，提高形态与数量评估的准确性

通过NTA获取的数据不仅可表征外泌体粒径，还可用于估算提取过程中的回收率，进一步量化外泌体纯化质量。

 

3、外泌体标志物分析：Western blot / ELISA / 质谱

外泌体富含一组特异性蛋白质，包括：

 

• 阳性标志物：CD9、CD63、CD81、TSG101、Alix
• 阴性标志物：Calnexin（内质网）、GM130（高尔基体）等

 

通过 Western blot 或 ELISA 检测上述标志物，可验证外泌体的特异性富集程度，并有效识别细胞器来源的污染，从而提升外泌体纯化质量控制的准确性。此外，质谱技术能够提供高通量蛋白组图谱，不仅助力质量控制，更能揭示外泌体的功能潜力和来源信息。

 

4、纯度与污染评估：总蛋白量、RNA完整性与脂蛋白污染

（1）蛋白/颗粒比值：常用于粗略判断样品纯度。理想值应低于0.5 μg /10⁹ particles，数值偏高可能提示可溶性蛋白污染。

（2）脂蛋白检测：如ApoA1或ApoB阳性可能表明血浆样本中高密度脂蛋白（HDL）干扰。

（3）RNA质量分析：外泌体RNA应主要为小分子RNA，无明显28S/18S rRNA峰。若检测到大量rRNA成分，可能提示胞外游离RNA或细胞裂解污染。

这些评估手段共同构建了定量化、可追溯的外泌体纯化质量控制体系，是推进标准化研究流程的关键。

 

高质量的外泌体研究，离不开科学、标准化的外泌体纯化质量评价体系。从形态确认到粒径分析、从标志物验证到污染排查，每一环节都直接影响实验数据的准确性与生物学解释的合理性。特别是在进行蛋白组学、代谢组学或miRNA组学等下游深度分析时，外泌体纯化质量与代表性更是决定性因素。百泰派克生物科技致力于为生命科学研究提供一站式的外泌体组学解决方案，涵盖提取、鉴定、组学分析与生信挖掘，助力科研人员提升研究效率、确保结果可信、加速成果产出。如您正在规划相关项目，欢迎联系我们获取定制化技术支持与数据分析服务。

 

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百泰派克生物科技特色项目

 

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

 

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

 

 

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

 

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

 

 

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

 

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

 

 

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

 

 

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

 

 

百泰派克生物科技七大检测平台

 

 

 

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

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