人唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素15蛋白,组氨酸标签

膜蛋白纯化攻略分享

设计应遵循以下两点： 在C-端加入标签 使用长标签或者引入一段linker 由于膜蛋白 N 端信号肽的存在，标签只能加在 C 端。8—10 个组氨酸标签能够提高膜蛋白的结合强度，进而提高收率。 有时可以采取快速的方法进行第一步亲和层析。在细胞破碎阶段，直接加入去垢剂来溶解膜蛋白（不需要提前分离细胞膜），通过此法得到的上清可直接用 HisTrap FF crude 预装柱进行纯化，缩短实验时间。   分子筛 vS 离子交换   亲和层析之后，往往使用分子筛做最后的精纯，但如果杂质依然很多或者膜蛋白

解码Siglec家族：关键成员、作用机制与实验研究策略

在免疫学研究的宏大版图中，糖生物学（Glycobiology）曾一度被视为“暗物质”——复杂且难以捉摸。然而，随着肿瘤免疫治疗进入瓶颈期，研究者们开始意识到，细胞表面那层被称为“糖萼（Glycocalyx）”的结构，并非仅仅是物理屏障，而是蕴含着极其精密的免疫调控逻辑。其中，Siglec（唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素）家族凭借其对唾液酸（Sialic acid）信号的精准解码能力，正迅速成为继 PD-1/PD-L1 之后，免疫检查点研究领域的又一个核心焦点。   对于试图在这一领域寻找突破

一篇搞定 IP、co-IP 实验

的，但是这结果是不是假阳性呢？还得做个阴性对照。阴性对照如何设置呢？考虑到整个实验体系会出现 beads、抗X抗体、诱饵蛋白 X、靶蛋白 Y（co-IP）： 可能出现的假阳性来源 需要的阴性对照 抗 X 抗体结合非特异的蛋白 与 IP 一抗种属亚型相同的免疫球蛋白（比如，抗 X 抗体是 Mouse IgG，阴性对照可使用 Mouse 免疫球蛋白） beads 对蛋白的非特异结合* 同上，此外还可进行 Pre clear，IP 正式实验前排除非特异结合蛋白。如果使用琼脂