75008600赛默飞Cryofuge 8 大容量离心机,

分子生物学常用实验技术（page 3)

酶的活性, 故应使用仔细纯化后的DNA。 材料： 待标记的DNA。 设备：高速台式离心机，恒温水浴锅等。 试剂： (1)10×切口平移缓冲液:0.5mol/L Tris?Cl (pH7.2); 0.1mol/L MgSO4 ; 10mmol/L DTT; 100μg/ml BSA。 (2)未标记的dNTP 原液:除同位素标记的脱氧三磷酸核苷酸外,其余3 种分别溶解于50mmol/L Tris?Cl (pH7.5)溶液中,浓度为0.3mmol/L。 (3)[α-32 P

测序技术及DNA序列测定结果分析

水中备用。 （9）显影溶液：60克碳酸钠（Na2CO3）溶于2升超纯水中，使用前加3ml 37% 甲醛和 40ml硫代硫酸钠溶液（10mg/ml）。 （10）95%乙醇。 （11）0.5%冰乙酸。        （12）Sigmacote (Sigma CAT. #SL-2)。 实验步骤   成功地使用银染测序系统需要对提供的操作方法进行仔细考虑。银染不如放射性检测法灵敏，而需要更多的模板量，此外，也不可能通过延长X-光胶片

分子实验方法10:测序技术

的链终止产物。它们具有共同的起始点，但终止在不同的的核苷酸上，可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段，凝胶处理后可用X-光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测。 第一节 非同位素银染测序系统操作技术 一、概述： Promega公司的SILVER SEQUENCETM DNA 测序系统是一种无放射性的序列分析系统，它通过灵敏的银染方法检测凝胶中的条带。 银染提供了一种对于放射性或荧光法来说更加快速，廉价的替代方法。测序结果可以在同一天内得到；电泳完成后经90分钟就可读序，这是常规