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2XF8 FastLong PCR MasterMix(含染

料)可扩高达10kb,延伸速度可5-10秒/kb
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  • ¥55 - 275
  • 艾德莱/aidlab
  • PC8001/02
  • 国产
  • 2025年12月30日
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    • 英文名

      2XF8 FastLong PCR MasterMix

    • 供应商

      杭州昊鑫生物

    • 规格

      5ml/1ml

    规格:5ml产品价格:¥275.0
    规格:1ml产品价格:¥55.0
    包装量:
     
    目录编号 包装单位
    PC8001 1 ml (含染料)
     
    组成
     
      PC8001 PC8002
    2 × F8 FastLong PCR MasterMix 1ml 5 ml
     
    储存: -20 ℃ 保存 2 年。短时间(1 个月内)使用可以置 4℃。
     
    制品说明:
    本产品包含 F8 FastLong 聚合酶、dNTPs 和优化的反应缓冲液,浓度为 2×。使用时只需加入模板、引物,并补足水至 Mix 终浓度为 1× 即可。本制品含红色追踪染料,不需要加上缓冲液即可直接上样进行电泳;也可经过纯化处理,以用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。PCR 产物 3’端带 A 头,纯化后可直接用艾德莱 pTOPO TA 系列载体(货号 CV14、CV15)克隆。
     
    产品特点:
    1. 超快的扩增速度:延伸速度可以达到 5-10kb/min,最短半小时完成 PCR。
    2. 突出的长片段扩增能力:可以扩增达 10 kb 的长片段(包括人类基因组此类的复杂模板)。
    3. 良好保真性:保真是 taq 的 3 倍以上。
    4. 强大扩增能力:产量高,对于一些有特殊结构的复杂模板和 GC 含量高模板有良好效果。
    建议 PCR 体系设置:
     
    Component 25 μl Reaction 50 μl Reaction Final Concentration
    2× F8 PCR MasterMix 12.5 μl 25 μl
    Forward Primer(10 μM) 0.5 μl 1 μl 0.2 μM
    Reverse Primer(10 μM) 0.5 μl 1 μl 0.2 μM
    Template DNA as required as required  
    ddH₂O up to 25 μl up to 50 μl  
     
    参考模板用量(50 μl 反应体系):
    质粒:0.1-10ng;细菌基因组:10-100ng;人类基因组:50-150ng;cDNA:1-5μl from RT reaction.
     
    建议 PCR 循环条件:
     
    Step Temperature Time Cycle Number
    Initial denaturation 94℃ 2-3 minutes  
    Denaturation 94℃ 10 seconds  
    Annealing 55℃ 10-15 seconds 25-35 cycles
    Extension 72℃ 10 seconds / kb  
    Final Extension 72℃ 1-5 minutes  
      4-8℃ Hold  

    注意事项:

    1. F8 扩增速度极快,短片段或者简单模板如质粒模板可以尝试 5 秒 /kb 延伸速度并采用较少循环数以进一步缩短 PCR 时间。长片段≥3kb 或者复杂模板产量较低可以采用 15-20 秒 /kb 延伸速度或者采用较多循环数。
    2. F8 产量较低时可尝试采用较长的延伸时间 (如 20 秒 /kb) 和循环数(如 35 个)可以提高 PCR 产物的产量。
    3. 对于 GC 含量很高的模板,短片段预变性和变性温度可以提高到 98℃/ 和适当延长变性时间。长片段为了避免 DNA 损伤不应该提高变性温度,应该适当延长预变性时间到 5 分钟,变性时间可以适当提高 5-10 秒。
    4. 如果扩增模 GC 含量高或者模板复杂扩增效果不佳时,可在反应混合物中加入 DMSO 到浓度 1%-8%,按 1% 梯度增加摸索最佳浓度。或者加入甜菜碱至终浓度 1.0-1.7 M。并采用降落 PCR(Touchdown PCR)
    每一批 2 × F8 PCR Mix 出货前必须通过下面的 2 种大小片段的扩增检测:

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