TRUEscript RT MasterMix(for re

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制品说明

适用范围

产品特点

1. 新一代反转录酶大幅度提高了稳定性和反转录效率。
2. 全预混的反转录 Mix，只需加入 RNA 和水，15 分钟简单快速完成反转录。
3. RNA 模板的体积最多可加到总体积的 80%，非常适合于低浓度 RNA 模板的逆转录反应。
4. 预混合 Mix 在 - 20℃不冻结，减少了化冻和混匀时间，使用更简单。
5. 本产品针对 qPCR 进行特别优化 oligo dT 和 N6 随机引物配比，使 cDNA 合成可从 RNA 转录本的各个区域起始并具有相同的反转录效率，最大限度保证了 qPCR 结果的真实性和重复性。

第一链 cDNA 合成

（以 20 μl 反应体系为例，也可以采用 10 μl 反应体系）

1. 将模板 RNA、5×TRUE RT MasterMix 在冰上解冻；RNase free H₂O 在室温解冻，解冻后迅速置于冰上。使用前将各种溶液轻弹或者轻微涡旋振荡混匀，可简短离心以收集残留在管壁的液体到管底。
2. 在 PCR 管里面加入以下成分：（建议使用 PCR 管配制，置 PCR 仪内反应）

3. 移液器轻轻吹打充分混匀按照如下程序进行反转录（总体积 20 μl）

• a 如使用 mRNA 模板是来源于真核细胞（如人、动物、植物的组织细胞）含有 Poly (A) 尾结构，省略此步骤；如使用 mRNA 模板是来源于原核细胞（细菌）或者病毒等不含 Poly (A) 尾结构，推荐做此 25℃孵育 5 min 的步骤，可以确保 N6 随机引物的有效退火。
• b 如果模板具有复杂二级结构或者高 GC 区域，可将反应温度提高至 50-55℃，有助于提高产量。
• c 若反转录后进行普通 PCR（克隆基因片段）扩增，42℃反转录时间延长到 30 min。

4. 得到的 cDNA 产物可立即用于 qPCR 反应，或在 - 20℃保存，并在半年内使用；长期存放建议分装后在 - 70℃保存。cDNA 应避免反复冻融。

RT-qPCR/RT-PCR

注意事项

1. 避免 RNase 污染。
2. 为保证反转录成功建议使用艾德莱试剂盒提取的高质量 RNA 样品。
3. 本制品最长可获得 5 kb 大小的 cDNA，下游实验如需长片段 PCR 扩增，可使用艾德莱 PC18-TRUEscript 1st Strand cDNA Synthesis Kit (OneStep gDNA Removal) 或者 PC44-THERMOScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit (OneStep gDNA Removal)。
4. 5×TRUE RT MasterMix 含甘油很粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失，用前请点用离心后使用，并且避免吸头外壁沾附损失。5×TRUE RT MasterMix 均为过量，即使每次 5×TRUE RT MasterMix 按照 3.6 μl-3.8 μl 使用也不影响使用效果。