坐骨神经损伤

周围神经损伤后影响外周神经修复的因素是神经生物学领域研究的热点。已知的证据表明，周围神经受损 后参与神经再生的主要因素包括神经中枢和神经局部的微环境。本章建立了坐骨神经损伤动物模型，研究切断坐骨神经后行为学的变化情况，为进一步研究神经损伤修复的机制及策略提供基础。

物种：
Rattus norvegicus (Rat，大鼠)
来源：
夹闭坐骨神经干导致坐骨神经损伤
模式动物品系：
SPF级SD大鼠，雄性，8 周
实验分组：
随机分组：对照组，模型组，阳性药物组，受试药物组(三个剂量梯度组)，15只每组

建模方法：

1. 对雄性大鼠行腹腔注射麻醉。将大鼠俯卧位固定于鼠固定架上，铺孔巾，暴露鼠左下肢并剪掉鼠 毛。
2. 碘酒、酒精消毒三遍，于左侧股后正中行纵行、长约6-8mm切口，暴露皮下肌肉。
3. 用止血钳钝性分离股二头肌、半腱肌、半膜肌后，分离出白色、粗大的坐骨神经，刺激后左足出现 抽动。
4. 距坐骨结节6-8mm处（定位）；用大止血钳夹闭坐骨神经干，压满3扣；挤压5秒钟后松开止血钳， 间隔10秒后再夹闭5秒钟，再放松10秒，第三次再夹闭5秒（定时）。
5. 神经干挤压伤宽度约3mm。9-0无创缝线标记后，将坐骨神经送回原位，整理肌肉，缝合创口；假手 术组大鼠麻醉后，仅切开皮肤暴露左侧坐骨神经但不做钳夹，在相应部位相同方法标记后缝合。

后期取材：
取出的动物饲养一周，结束后，注射水合氯醛麻醉大鼠，将鼠仰卧位固定于大鼠固定架上。自颌下 至小腹行胸、复联合切口，切断肋骨，剪断膈肌，暴露出跳动的心脏。用16号针头由左心尖刺入左心室， 用软静脉留置导管沿左心室经主动脉瓣插入主动脉，剪开右心耳。

先用0.9%生理盐水250ml快速冲洗组织内血液，其后用4%哆聚甲醛固定液快速推注100ml，再缓慢推 注100ml，直至使鼠尾巴翘起，身体逐渐僵硬，颜色变白为止。灌注后，立即将身体一僵硬的鼠于俯卧位 固定于手术台上，由胸-骶部沿脊柱正中切开，暴露及分离背部肌肉，沿十二肋肌部切断T12 L1水平脊 柱、脊髓。沿坐骨神经走行切腰4、腰5、骶1段脊髓和包括挤压伤在内的上下各2mm的坐骨神经。

同法切取假手术组的相应部位等长标本。分三种方法进行处理及固定。

1. 4%哆聚甲醛固定液中固定，制备石蜡切片。
2. 2.5%戊2醛液固定后，备做电镜。
3. 液氮中冷冻，备做冰冻切片。