去甲基雏叶龙胆酮 （CAS:2980-32-7)

Cell：诺奖得主新作！在大量病毒中发现微型 CRISPR 系统，可高效编辑人类和植物基因组

效率。在拟南芥中，Casλ 在内源性 PDS3 基因上表现出高达 18% 的编辑效率，显著高于 CasΦ 的效率，且编辑的效率高度依赖于温度，在 23℃ 没有发生编辑，在 32℃ 发生最高水平的编辑。此外，Casλ 还能够编辑六倍体小麦（比人类基因组大 5 倍的基因组）原生质体中的内源性抗病基因 Snn5。 Casλ RNPs 编辑人类，拟南芥和小麦细胞的内源基因。来源：Cell 通过低温电子显微镜测定，研究人员发现 Casλ-crRNA-dsDNA 复合物呈现出一个紧凑的双叶结构，类似于 Cas

张峰手稿：基因工程技术之CRISPR-Cas9

最近，随着基因编辑技术不断曝光，这项技术也越来越火，越来越受到关注，但大部分媒体都只是浅尝辄止进行宣传而已，实质性的怎么操作，具体的步骤却很少涉及。鉴于此，师兄就把张峰的手稿扒拉出来，分享给大家。同时也欢迎大家与我探讨，我的微信号;shixiongcoming，向我申请的时候注意，写上你的理由哦，最近加我的人太多，不注明来由的读者，别怪师兄拒绝你呦。   Genome Engineering Using CRISPR-Cas9 System Le Cong

CRISPR基因敲入为什么比敲除难

同一个靶点，做敲除两周就能看到明显的 indel，做敲入两个月可能还拿不到一个正确的克隆。这不是操作水平的问题，而是两条技术路径依赖的细胞机制完全不同。 先说结论：敲除依赖 NHEJ，它在整个细胞周期都活跃、不需要模板、速度快，所以效率天然高；敲入依赖 HDR（或同源非依赖的其他路径），HDR 只在 S/G2 期活跃、需要外源供体模板进入细胞核并与断裂末端同源重组，效率通常只有百分之几甚至更低。此外，敲入还要面对"编辑后的等位基因被 Cas9 再次切割"和"随机整合的供体模板产生假阳性"两个