PBS-501巴罗克PBS超低内毒素缓冲液(1X)，无菌，p

细胞培养大攻略

胎牛血清：（进口血清）要求剖腹取胎制成。 国内厂家往往不能做到，经常把出生2天以内采血称为胎牛血清。 根据血清的生产工艺及血红蛋白、内毒素含量又分为：   （1）.特级胎牛血清：40纳米过滤，内毒素含量≤10 EU，血红蛋白含量≤10 mg/dl。   （2）.优等胎牛血清：经过3次100纳米过滤，内毒素含量≤25 EU/ml，血红蛋白含量≤25 mg/ml。   （3）.标准胎牛血清：3次100纳米过滤，低内毒素，低血

蛋白表达分析的金标准方法：WB（Western Blot）实验解析

：可递送毒性致死膜蛋白、难表达靶点；整合效率高，稳定株构建周期短。 短板：存在生物安全风险，GMP药物生产受限；操作流程复杂、成本高。 三、常规脂质体转染法详细实验流程 1. 实验试剂 高纯度无内毒素质粒（内毒素＜0.1 EU/μg）、Lipofectamine 3000/2000、Opti-MEM无血清培养基、完全DMEM（10%胎牛血清，无双抗）、PBS缓冲液。 2. 实验步骤 Ø 步骤1：转染前细胞铺板准备 复苏50代以内、活力＞95%的对数生长期HEK293细胞，消化计数；6孔板每孔接种1.2

【原创】蛋白质纯化武器—工艺篇（欢迎补充）

洗涤一次。菌体洗涤可以去除一些培养基中的杂质，及代谢产物，减少对后续纯化的影响。如果菌体已经冻存过，冻融的菌体可能有部分破碎，就不要洗涤菌体了。 小量菌体的悬浮可以用5ml的枪头吹打，再磁力搅拌。大量菌体的悬浮可以用分散乳化机。破菌缓冲液的用量一般为1∶10—1∶20，即1g湿菌体用10—20ml的破菌缓冲液。 （2）破菌缓冲液的选择 选择何种破菌缓冲液，应该与后续的纯化方法密切相关，不能一刀切。而且，破菌缓冲液还与是否可溶表达相关。对于可溶表达的重组蛋白，一般就选用第一步层析纯化的平衡