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1000
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广州艾迪基因科技有限责任公司
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人
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液氮保存
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详见说明
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1x10^6 cells
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文献和实验wj1989113 最近一直在做慢病毒载体,用的是第二代的三质粒系统,目的片段是一个肝细胞的转录因子。载体构建好之后,包装了一批病毒。然后拿慢病毒感染肝癌细胞株3B和Huh7细胞,想通过PCR和Western验证病毒的表达情况。出现了一些问题: 1、每次拿慢病毒感染肝癌细胞株,荧光都很亮,但是做PCR或者Western之后,加对照病毒GFP组的细胞和目的病毒无差异。(条带都较亮)尤其是Western,几乎没有差异。 2、感染
静脉注射,病毒注射总量为 1×10^11 vg/小鼠。Luc 的表达由 cTnT 启动子控制。(DOI: 10.1038/gt.2010.105) 图 4. 五种 AAV 血清型在小鼠体内的心脏基因递送效率比较。注射方式为左心室前壁注射,病毒注射总量为 5×10^10 vg/小鼠,体积为 10μL。Luc 的表达由 cTnT 启 动子控制。(DOI:10.1002/jgm.1576) 图 5. 五种 AAV 血清型以不同剂量注射至小鼠体内的心脏基因递送效率比较。注射方式为颈静脉注射。EGFP
最近开始自己包装慢病毒shRNA,用的是之前组里师姐的protocol,基本上是基于TRONO LAB的protocol。之前师姐包装的病毒,效率很高,基本上能KD八成到九成。最近我自 己包装了两次,浓缩后根据之前师姐包装的病毒用量感染肝癌细胞,细胞生长速度明显 延缓,形态改变也跟之前的相似。但是做western却只能看到很marginal的蛋白水平降 低,在有的细胞株甚至完全看不到KD。我用GFP质粒转染HEK293FT,效率很高,24小时 至少看到90%的细胞有GFP表达
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