胃肠道组织解离试剂盒

产品简介: 

品牌：bestopcell/百奥益康  

货号：BA3316 

产品名称：胃肠道组织解离试剂盒 

产品规格：10 rxns 

 

在高通量单细胞测序实验中，制备出高质量的单细胞悬液是实验成功的关键，百奥益康团队累积了10,000+个样本的单细胞测序服务经验，涉及150+种不同类型的组织，具有丰富的新鲜组织解离的经验。在此基础上，百奥益康自主研发了胃肠道组织解离试剂盒，利用该试剂盒，可高效的制备出胃肠道组织高质量的单细胞悬液。

 

 

产品优势

操作便捷：操作简单便捷，可轻松实现胃肠道组织的解离，制备出高质量的单细胞悬液。

活性较高：利用该试剂盒制备的单细胞悬液活性较高，结团率较低。

应用场景：适用于人、小鼠等哺乳动物胃肠道组织单细胞悬液制备，可用于单细胞测序、 细胞培养或其他细胞相关检测。

测试效果

我们对新鲜的小鼠胃肠道进行了实验，结果显示利用胃肠道解离试剂盒解离后获得的细胞悬液质量较好，能满足单细胞转录组测序实验。

测试流程：

 

 

 

 

测试结果：
利用胃肠道解离试剂盒制备的胃肠道细胞悬液质检结果

 

 

项目实测

目前我们已完成大量用该解离试剂盒处理的样本的单细胞测序项目。

 

 

部分项目实测胃肠道解离后数据表现

 

 

 

 

 

 

 

部分项目实测胃肠道解离后单细胞测序分群表现

注：数据均经对应项目的客户同意后发布

 

产品FAQ

1.    Q：这款试剂盒仅适用于哺乳动物胃肠组织吗？对胃肠道不同部位组织（如胃黏膜、小肠绒毛、结肠黏膜）的解离效果是否有差异？能否用于非哺乳动物胃肠组织（如鱼类肠道）？

A：试剂盒适用于人、小鼠等哺乳动物的全段胃肠道组织（胃、小肠、结肠等），对不同部位组织的解离效果有轻微差异：小肠绒毛组织较脆弱，消化时间建议缩短至 20-30 分钟，避免绒毛结构断裂；胃黏膜和结肠黏膜因含较多胶原纤维，消化时间可延长至 30-40 分钟，需通过质检动态调整。不适用于非哺乳动物胃肠组织，鱼类等非哺乳动物胃肠细胞的细胞膜结构、纤维成分与哺乳动物差异大，试剂盒酶体系无法精准降解其 extracellular matrix，易导致解离不彻底或细胞活性骤降。

2.    Q：试剂盒标注 “10 rxns”，每次实验需用 4mL Buffer A、100μL Enzyme B 和 10μL Enzyme C，若单次仅处理 100mg 胃肠组织（标准用量的 1/2），能否按比例减少试剂用量？

A：不建议按比例减少试剂用量。Buffer A 不仅是反应介质，还需维持组织混悬环境，4mL 体积能确保组织碎块充分分散；Enzyme B 和 Enzyme C 的比例经过精准配比，减少用量会导致酶浓度不足，无法有效分解胃肠组织纤维，反而增加细胞结团率。处理 100mg 组织时，仍需按标准用量添加试剂，后续离心收集细胞时，可通过延长离心时间（从 5 分钟增至 8 分钟）确保细胞充分沉淀，避免因液体体积相对过大导致细胞流失。

3.    Q：步骤 2 消化时，水浴锅需 “每隔 3-5 分钟手动摇晃”，杂交炉需 “转速 20-30 转 / 分钟”，两种设备在操作效果上有何核心差异？哪种更适合胃肠组织解离？

A：核心差异在于 “酶与组织接触均匀性”：杂交炉的自动转速能让胃肠组织碎块始终悬浮在解离液中，避免因重力沉降导致局部酶解过度（如管底组织）或不足（如液面组织）；水浴锅手动摇晃若频率不一致，易出现小肠绒毛组织过度消化、结肠黏膜组织未解离的情况。从效果来看，杂交炉更适合胃肠组织解离，尤其对结肠等纤维丰富的组织，单细胞得率比水浴锅高 18%-25%。若用水浴锅，需严格按 3 分钟间隔摇晃，每次摇晃 10 秒，确保无组织沉底。

4.    Q：步骤 5 和步骤 6 均需用 70μm 细胞筛过滤，若实验室缺少 70μm 筛网，能否用 50μm 或 100μm 筛网替代？替代后会有什么影响？

A：不可用 50μm 或 100μm 筛网替代。50μm 筛网孔径过小，会截留胃肠组织中的正常单细胞（如小肠上皮细胞直径约 12-18μm，虽能通过，但筛网易被纤维碎片堵塞，导致过滤困难，甚至挤压细胞降低活性）；100μm 筛网孔径过大，无法有效过滤未消化的组织碎块（如胃黏膜纤维碎片），这些碎片会随细胞进入后续步骤，干扰细胞计数准确性，还可能堵塞单细胞测序芯片。若缺少 70μm 筛网，需联系供应商紧急调配，或选择同品牌兼容的 70μm 筛网（货号：BS70-C），不可随意替换。

 

5.    Q：说明书提到 “DMEM 培养基可替代 RPMI 1640 培养基”，替代后是否需要调整离心参数或消化时间？两种培养基对胃肠细胞活性的影响有差异吗？

A：替代后无需调整离心参数（仍为 4℃、300×g 离心 5 分钟）和消化时间。DMEM 与 RPMI 1640 均为哺乳动物细胞常用基础培养基，虽在葡萄糖、氨基酸含量上有差异，但均能为胃肠组织解离提供适宜的渗透压（280-320mOsm/kg）和 pH（7.2-7.4），对酶解效率无影响。对细胞活性的影响极小：实验数据显示，用两种培养基解离小鼠小肠组织后，细胞活性差异≤6%，可根据实验室现有库存选择，无需特意更换。

 

6.    Q：步骤 7 用含 5% FBS 的 PBS 清洗细胞，若实验需无血清操作（如某些细胞分选实验），能否用不含 FBS 的 PBS 替代？或用血清替代品（如 BSA）替代 FBS？

A：不可用不含 FBS 的 PBS 替代，FBS 的核心作用是中和残留酶活性（Enzyme B 和 Enzyme C），避免酶继续损伤细胞；不含 FBS 的 PBS 无法中和酶活性，会导致细胞活性在清洗后下降 30% 以上。若需无血清操作，可用含 1% BSA 的 PBS 替代含 5% FBS 的 PBS，BSA 能起到类似的酶中和作用，且不含血清成分；但需注意，BSA 替代后需将清洗时间从 5 分钟延长至 8 分钟，确保酶活性完全被中和，避免残留影响后续实验。

 

7.    Q：Enzyme C 需 4℃避光保存，若在室温下放置了 30 分钟（如取用时忘记放回冰箱），还能继续使用吗？长期在 - 20℃保存 Enzyme C 会有什么后果？

A：室温放置 30 分钟可继续使用，但需立即放回 4℃冰箱，且使用前需充分混匀 ——Enzyme C 为活性酶制剂，室温短期放置（≤30 分钟）活性损失≤10%，不影响解离效果。不可长期在 - 20℃保存 Enzyme C，低温会导致 Enzyme C 变性失活（-20℃冷冻 24 小时后，活性下降 70% 以上），无法与 Enzyme B 协同作用分解胃肠组织纤维，导致解离失败。Enzyme C 的正确保存条件为 4℃避光，有效期 1 年，需严格遵循。

8.    Q：若解离后细胞悬液中红细胞较多，需用 BA3311 红细胞裂解液去除，该操作应在哪个步骤后进行？裂解时需注意什么，避免损伤胃肠细胞？

A：应在步骤 7 之后、步骤 8 之前进行。具体操作：步骤 7 弃上清后，加入 1mL BA3311 红细胞裂解液，冰浴孵育 5 分钟（避免室温孵育损伤胃肠细胞），4℃、300×g 离心 5 分钟，弃上清，再用 5mL 含 5% FBS 的 PBS 重悬（额外增加 1 次清洗），之后进入步骤 8。注意事项：①裂解时间不可超过 8 分钟，冰浴能减缓裂解液对胃肠细胞的毒性；②若红细胞过多（如胃黏膜组织含大量毛细血管），可重复裂解 1 次，但需再次用 PBS 清洗，避免裂解液残留影响后续实验（如细胞分选的荧光信号干扰）。

 

订购须知: 

1）所有产品仅可用于科研目的的生物学实验（forresearchuseonly），严禁用于人体或动物的医疗目的