- ￥1600
- bestopcell/百奥益康
- 北京
- BA3325
- 2025年11月30日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
见包装
- 保质期：
见包装
- 库存：
20
- 供应商：
广州市左克生物
- 规格：
10 rxns
产品简介:
品牌：bestopcell/百奥益康
货号：BA3325
产品名称：肺组织解离试剂盒
产品规格：10 rxns
品牌介绍:
北京百奥益康医药科技有限公司是一家专注单细胞分子检测创新技术及临床转化应用的国家高新技术企业，由中国科学院科学家、海归科学家、临床专家、国内知名高通量检测资深研发专家联合创立，核心团队在单细胞分子检测领域深耕近10年，在单细胞分子检测技术创新、大数据智能分析与临床转化方面具有丰富经验。
在高通量单细胞测序实验中，制备出高质量的单细胞悬液是实验成功的关键，百奥益康团队累积了10,000+个样本的单细胞测序服务经验，涉及150+种不同类型的组织，具有丰富的新鲜组织解离的经验。在此基础上，百奥益康自主研发了肺组织解离试剂盒，利用该试剂盒，可高效的制备出肺组织高质量的单细胞悬液。
产品优势
操作便捷：操作简单便捷，可轻松实现肺组织的解离，制备出高质量的单细胞悬液。
活性较高：利用该试剂盒制备的单细胞悬液活性较高，结团率较低。
应用场景：适用于人、小鼠等哺乳动物肺组织单细胞悬液制备，可用于单细胞测序、 细胞培养或其他细胞相关检测。
测试效果
我们对新鲜的小鼠肺组织进行了实验，结果显示利用肺组织解离试剂盒解离后获得的细胞悬液质量较好，能满足单细胞转录组测序实验。
测试流程：
测试结果：
利用肺组织解离试剂盒制备的肺组织细胞悬液质检结果
项目实测
目前我们已完成大量用该解离试剂盒处理的样本的单细胞测序项目。
部分项目实测肺组织解离后数据表现
部分项目实测肺组织解离后单细胞测序分群表现
注：数据均经对应项目的客户同意后发布
产品 FAQ
1. Q：解离肺组织时发现肺泡结构难以破坏，酶解 1 小时后仍有大量完整肺泡，导致单细胞得率极低，是什么原因？该如何调整操作破坏肺泡结构？
A：肺泡结构未破坏是因肺组织剪碎不充分，肺泡腔未暴露，酶解液无法接触肺泡壁纤维。调整方法：①将肺组织剪至 0.2mm³ 以下（比常规组织小 1/3），确保肺泡腔破裂；②酶解前用 1mL 注射器针头反复穿刺组织碎块，物理破坏肺泡壁；③酶解时补加 50μL 肺组织解离液，延长酶解时间至 1.5 小时，可使肺泡结构破坏率提升至 85% 以上，单细胞得率提高 60%。
2. Q：解离慢性阻塞性肺疾病（COPD）模型小鼠的肺组织时，细胞悬液中出现大量黏稠黏液，包裹细胞导致过滤困难，该如何去除这些黏液？
A：黏液是 COPD 肺组织分泌的黏蛋白与酶解产物混合形成的。去除方法：①酶解时加入 100μL 0.1% 透明质酸酶（自备，无细胞毒性），降解黏液中的黏多糖成分；②过滤前将细胞悬液在 4℃、500×g 离心 3 分钟，弃上层黏液层；③用含 2% FBS 的 PBS 冲洗 70μm 细胞筛 3 次，确保黏液随滤液流出，避免堵塞筛网，可使过滤速度提升 50%。
3. Q：使用杂交炉酶解时，发现离心管内液体出现分层（上层清澈、下层浑浊），酶解效率不均，是什么原因？该如何解决液体分层问题？
A：分层是因肺组织含密度较高的血管和纤维成分，在杂交炉转速不足时沉降至管底，导致酶解液与组织接触不均。解决方法：①将杂交炉转速从 20-30 转 / 分钟提高至 25-35 转 / 分钟，增强液体对流；②酶解前在离心管内加入 1 颗无菌磁力搅拌子（直径 3mm，自备），利用磁力辅助混匀；③每隔 15 分钟手动颠倒离心管 1 次，确保组织与酶解液充分接触，可使酶解均匀性提升 70%。
4. Q：试剂盒开封后，肺组织解离液在 - 20℃保存 5 个月，使用时发现酶解后组织仍呈块状，酶活性明显下降，该如何快速判断解离液是否完全失效？
A：可通过 “微型酶解实验” 判断：①取 50μL 解离液与 10mg 肺组织碎块混合，37℃孵育 30 分钟；②用移液器吹打 10 次，若组织块仍大于 1mm³ 且无明显细胞释放，说明解离液完全失效；③若有少量细胞释放但酶解不充分，可将解离液用量加倍至 480μL，酶解时间延长至 2.5 小时，勉强满足基础实验需求（不建议用于单细胞测序）。
5. Q：解离新生小鼠（出生 3 天内）肺组织时，细胞易出现大量死亡（活性仅 40%），是什么原因导致的？该如何调整操作保护幼龄肺细胞？
A：幼龄肺细胞细胞膜脆弱，易受酶解液和机械力损伤。调整方法：①将酶解时间从 0.5-2 小时缩短至 20-30 分钟，减少酶对细胞的损伤；②酶解时使用水浴锅，每隔 5 分钟轻轻摇晃（避免剧烈振荡）；③清洗时用含 10% FBS 的 PBS 替代常规 5% FBS 的 PBS，增强细胞保护，可使细胞活性提升至 75% 以上。
6. Q：离心后发现细胞沉淀中夹杂大量黑色颗粒（疑似碳尘），影响后续细胞计数和染色，该如何去除这些杂质颗粒？
A：黑色颗粒多为肺组织吸入的外源杂质或细胞碎片聚集形成。去除方法：①离心后用 1mL 含 5% FBS 的 PBS 轻轻吹打沉淀，使颗粒悬浮；②静置 2 分钟，待颗粒沉降后，吸取上层细胞悬液转移至新离心管；③重复操作 2 次，可去除 80% 以上的黑色颗粒，不影响细胞活性（活性损失≤5%）。
7. Q：使用水浴锅酶解时，因实验中断忘记观察，酶解时间长达 3 小时，发现细胞活性降至 30%，该如何补救以保留部分可用细胞？
A：酶解过度导致细胞大量死亡，可通过 “梯度离心” 筛选存活细胞：①将细胞悬液在 4℃、200×g 离心 3 分钟，弃上层死细胞和碎片；②用 5mL 含 10% FBS 的 PBS 重悬沉淀，4℃、300×g 离心 5 分钟；③取沉淀用台盼蓝染色，存活细胞多集中在沉淀下层，可筛选出活性≥60% 的细胞（得率约为原来的 30%），仅适用于细胞培养等对细胞量要求较低的实验。
8. Q：解离后细胞悬液中红细胞占比达 55%，使用 BA3311 红细胞裂解液处理时，发现肺血管内皮细胞活性从 80% 降至 50%，该如何优化裂解条件减少内皮细胞损伤？
A：内皮细胞损伤是因裂解液对血管内皮细胞有一定毒性。优化方法：①将裂解液稀释 1 倍（用 PBS），降低浓度；②孵育温度控制在 4℃，时间缩短至 2-3 分钟，显微镜下观察到红细胞裂解后立即终止；③裂解后用含 10% FBS 的 PBS 清洗 3 次，充分去除残留裂解液，可使血管内皮细胞活性维持在 70% 以上。
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文献和实验的酶、优化酶浓度和孵育时间，大部分组织都常用酶解法。 （3）组合法：即机械解离+酶解，使组织均匀充分地接触酶消化液，减少了强机械力和过长酶消化时间对细胞造成的伤害。有商品化的经过验证的解离试剂盒可以选择，搭配全自动组织解离仪，做到高效而稳定地组织解离。 5. 如何解离肿瘤组织？ 由于肿瘤组织异质性高细胞类型多（肿瘤细胞、成纤维细胞、免疫细胞、内皮细胞等）、细胞间连接紧密细胞外基质异常沉积、结构和微环境复杂、异常代谢等问题，肿瘤组织的解离较为困难。样本的选取需要合适，并且也要根据不同的肿瘤组织特
-132-997）进行进一步纯化以满足测序要求。 FFPE 样本（福尔马林固定石蜡包埋）：甲醛固定导致蛋白质和核酸发生交联和片段化，无法用于制备活细胞。此类样本同样可以使用商业化试剂盒（130-134-089）分离细胞核进行 snRNA-seq 或使用解离试剂盒（130-118-052）解离分选后进行基因组分析。 自动化样本解离制备细胞平台 （1）传统细胞制备方法的局限性 传统的样本制备方法，尤其是对复杂实体组织（如肿瘤、脑组织、纤维化组织）的处理，长期以来严重依赖手动操作。手动解离
ws88523758 小弟对于实验处于纯菜鸟，糊里糊涂的做了半年多了，结果数据参差不齐，临近毕业，焦虑万分，特停高手们指导求救！ 我做的是大鼠的系膜细胞，用TNF-α刺激后，再用中药干预24h，测细胞上清中的ikb和NF-KB,用的都是ELISA法。 ikb测值很低，据查当IKBα被磷酸化后分解后，P65和P50才能解离激活。所以，当刺激开始的时候，磷酸化的IKBα上调，IKBα下调。由于P65活化后又可以上调IKBα表达，所以，经过一定时间之后
