脂肪组织细胞核悬液制备试剂盒

产品简介: 

品牌：bestopcell/百奥益康  

货号：BA3342 

产品名称：脂肪组织细胞核悬液制备试剂盒 

产品规格：10 rxns 

品牌介绍: 

  北京百奥益康医药科技有限公司是一家专注单细胞分子检测创新技术及临床转化应用的国家高新技术企业，由中国科学院科学家、海归科学家、临床专家、国内知名高通量检测资深研发专家联合创立，核心团队在单细胞分子检测领域深耕近10年，在单细胞分子检测技术创新、大数据智能分析与临床转化方面具有丰富经验。 

 

在高通量单细胞测序中，脂肪组织由于其细胞比较大、含有大量油脂、密度较低，在进行单细胞实验过程中极易漂浮丢失，无法形成有效的单细胞悬液，且细胞膜在解离消化的过程中极易破裂，导致细胞质内容物泄漏和降解。此时单细胞核 悬液成为有效的替代方案。

 

百奥益康脂肪组织细胞核悬液制备试剂盒，专为从脂肪组织中分离高纯度单细胞核而设计。其独特的配方和优化的流 程，能够高效地从复杂样本中提取高质量的细胞核悬液，为高通量单细胞测序等前沿研究提供可靠的解决方案。

 

产品优势

适用范围广：适用于人及其他哺乳动物的脂肪组织样本的细胞核的分离提取，突破传统解离法对样本活性的依赖。 

应用场景丰富：可用于单细胞核转录组测序、单细胞ATAC测序等相关实验，助力科研人员深入探索细胞核相关的生物学信息。

性能卓越：制备的单细胞核悬液质量高，细胞核数充足，核膜完整，完全满足单细胞测序等下游实验的严格要求。 

数据优异：在测试实验中，使用该试剂盒制备的细胞核悬液的质检结果理想，为高质量的研究数据提供了保障。 

实践经验丰富：基于超过10,000个样本、150余种组织类型的组织解离经验开发而成，历经多年实验验证。

 

测试效果

我们对新鲜的小鼠脂肪组织进行了实验，结果显示百奥益康脂肪组织细胞核悬液制备试剂盒获得的细胞核悬液质量较好，能满足单细胞核转录组测序实验。

 

测试流程：

 

 

 

测试结果：

 

 

利用脂肪组织细胞核悬液制备试剂盒获得的单细胞核悬液质检结果

 

 

小鼠脂肪单细胞核悬液镜检图

 

 

项目实测

目前我们已完成大量用该细胞核悬液制备试剂盒处理的样本的单细胞核测序项目。

 

 

部分项目实测脂肪组织制备单细胞核悬液后数据表现

 

 

部分项目实测脂肪组织制备单细胞核悬液后镜检结果

 

 

 

 

部分项目实测脂肪组织制备单细胞核悬液后单细胞核测序分群表现

注：数据均经对应项目的客户同意后发布
 

 

产品 FAQ

1.    Q：处理冻存脂肪组织时，按步骤用液氮速冻后研磨，发现组织易结块（直径＞1mm），无法形成均匀匀浆，导致后续裂解不充分，该如何解决冻存组织结块问题？

A：冻存脂肪组织因含油脂易结块，需优化研磨前处理。解决方法：①将速冻后的组织块用无菌手术刀切成 1mm³ 以下的碎块（常规黄豆粒大小），减少结块基础；②研磨管中先加入 0.5mL 裂解液，再放入组织碎块，避免组织直接接触锆珠导致粘连；③研磨时采用 “30 秒研磨 + 10 秒停顿” 的间歇模式，共研磨 5-6 次，可使匀浆均匀度提升 80%，避免裂解残留。

 

2.    Q：按要求配制含 BSA 的裂解液时，发现 BSA 难以完全溶解，溶液中出现白色絮状物，影响后续细胞核提取，该如何确保 BSA 充分溶解？

A：BSA 在低温下溶解缓慢，需优化溶解方式。操作方法：①将裂解液提前从 4℃取出，室温静置 10 分钟（避免温度过低影响溶解）；②称取 BSA 粉末时，先将其研磨成细粉（用无菌研钵），再缓慢加入裂解液；③用 1mL 低吸附枪头反复吹打 20 次，期间置于 37℃水浴锅间断孵育（每次 30 秒，共 3 次），可使 BSA 完全溶解，溶液澄清度达 95%。

 

3.    Q：步骤 8 加入 PB2 时，按要求沿离心管底层缓慢滴加，却仍导致 PB1 - 细胞核混合液与 PB2 分层紊乱，无法形成清晰界面，是什么原因？该如何调整加样方式？

A：分层紊乱多因加样速度过快或枪头未贴近管底。调整方法：①选择 1mL 低吸附枪头，将枪头尖端贴紧 5mL 离心管底部（距离管底＜1mm）；②控制 PB2 滴加速度，每滴间隔 3 秒，待前一滴完全扩散至管底后再滴加下一滴；③加样时保持离心管倾斜 45°，使 PB2 沿管壁缓慢流向管底，可使分层成功率提升至 90%，避免界面紊乱。

 

4.    Q：步骤 10 离心（4℃、3000×g、20 分钟）后，观察到溶液仅分成 2 层（上层碎片液、下层沉淀），缺失中间核层，是什么原因导致核层消失？该如何调整离心参数？

A：核层消失多因离心机加速度 / 减速度过高，破坏分层结构。调整方法：①严格将离心机加速度、减速度设为 “居中” 档位（如数字离心机设为 “5”），避免高速升降速冲击界面；②离心前在 PB3 上层轻轻滴加 100μL 含 1% BSA 的 PB2，形成缓冲层；③补加 0.3mL PB2，重新按步骤加样离心，可使核层清晰呈现（位于 PB2 与 PB3 交界处），核层回收率达 85%。

 

5.    Q：步骤 11 吸取核层时，不小心吸入部分 PB3，导致细胞核悬液中混入大量杂质，后续过滤仍无法完全去除，该如何纯化含 PB3 杂质的核悬液？

A：混入 PB3 的核悬液需通过 “二次分层” 纯化。操作方法：①将污染的核悬液转移至新的 5mL 离心管，加入等体积（400μL）的 PB1，轻轻混匀；②沿管底缓慢滴加 400μL PB2，再按步骤 9 加入 400μL PB3，4℃、3000×g 离心 20 分钟；③重新吸取中间核层（约 300μL），可去除 95% 的 PB3 杂质，细胞核纯度恢复至 90% 以上。

 

6.    Q：处理含大量油脂的内脏脂肪组织时，步骤 4 过滤后滤液表面漂浮一层油脂，导致后续离心时细胞核与油脂混合，无法有效沉淀，该如何去除滤液中的油脂？

A：内脏脂肪油脂含量高，需提前除油。处理方法：①过滤后将 15mL 离心管置于 4℃冰箱静置 15 分钟，使油脂自然漂浮至液面；②用 1mL 低吸附枪头轻轻吸除液面油脂（每次吸除 200μL，避免吸入下层滤液）；③向滤液中加入 0.5mL PB1，轻轻混匀，可进一步促进剩余微量油脂上浮，再吸除 1 次，油脂去除率达 90%，不影响细胞核沉淀。

 

7.    Q：试剂盒开封后，PB3 在 4℃避光保存 13 个月，使用时发现核层回收率从 80% 降至 45%，是试剂失效了吗？该如何快速验证 PB3 有效性？

A：PB3 4℃有效期为 1 年，超期后密度成分易降解。验证方法：①取 1mL PB3 与 1mL 含已知浓度（1×10⁶/mL）的肝细胞核悬液混合，按步骤 8-10 操作；②若离心后核层体积＜300μL 且杂质含量＞30%，说明 PB3 失效；③若核层体积在 300-400μL 之间，可将 PB3 用量增加至 700μL（常规 600μL），核层回收率可提升至 70%，勉强用于基础实验（不建议单细胞测序）。

 

8.    Q：步骤 15 用 20μm 细胞筛过滤时，发现细胞核大量被截留（截留率＞40%），导致回收率低，是什么原因？该如何调整过滤操作？

A：细胞核截留多因筛网孔径偏差或细胞悬液浓度过高。调整方法：①过滤前用含 1% BSA 的后悬液预湿润 20μm 细胞筛，降低细胞核与筛网的吸附力；②将核悬液浓度稀释至 5×10⁵/mL（常规 1×10⁶/mL），减少筛孔堵塞；③过滤时用 5mL 注射器缓慢推动液体（流速＜1mL/min），避免用力挤压导致细胞核破损，可使截留率降至 10% 以下。

 

9.    Q：步骤 6 离心后，弃上清时发现沉淀松散呈 “絮状”，约 20% 细胞核随上清流失，该如何获得致密的细胞核沉淀？

A：沉淀松散因脂肪细胞核表面含油脂，相互排斥难以聚集。解决方法：①将离心转速从 500×g 提高至 600×g，离心时间延长至 8 分钟；②步骤 7 重悬沉淀前，用 0.5mL 前悬液轻轻冲洗离心管内壁（避免直接冲击沉淀）；③重悬时加入 20μL 1% 多聚赖氨酸（自备，无核毒性），中和细胞核表面负电荷，可使沉淀致密性提升 65%，流失率降至 5% 以下。

 

10.    Q：进行细胞核 RNA 相关实验时，按要求添加 RNase 抑制剂（终浓度 1U/μL），但后续质检发现 RNA 降解严重（RIN 值＜6.0），是什么原因导致的？该如何优化 RNase 抑制操作？

A：RNA 降解多因抑制剂添加不及时或用量不足。优化方法：①所有试剂（裂解液、前悬液等）在使用前 10 分钟添加 RNase 抑制剂，避免提前添加导致活性下降；②对于脂肪组织（RNA 易降解），将抑制剂终浓度提高至 1.5U/μL（常规 1U/μL）；③步骤 4 过滤后，立即向滤液中补加 10μL 抑制剂，防止过滤过程中 RNase 污染，可使 RIN 值提升至 7.0 以上，满足测序需求。

订购须知: 

1）所有产品仅可用于科研目的的生物学实验（forresearchuseonly），严禁用于人体或动物的医疗目的