N-生物素多巴胺 CAS号 241142-94-9

免疫PCR技术

DNA去检测人源的标本。DNA片段大小为300~500bp，生物素标记可采用PCR方法，根据报告DNA的核苷酸序列合成一对引物，其中一个引物的5’端碱基上带有生物素标记。在0.5mlPCR管中按表将下列试剂混合。95℃加热5min，然后在PCR仪上按下列程序扩增：94℃ 1min;55℃ 1min; 72℃ 1min; 40个循环。最后72℃延伸10min。加等量酚-氯仿抽提，然后加10ul 3Mol/L Kac，250uL无水乙醇，置-70℃ 30min。离心沉淀DNA片段，用70%乙醇洗一次

固相杂交反应的特点、问题及解决办法

标记的琼脂糖[5,6]。生物素标记的探针分子可快速地结合到位于电极上方的琼脂糖上，从而提高了杂交速度。其原理为:当位于待检位点链亲和素标记的琼脂糖凝胶下方的微电极引入直流正电压后，溶液中的生物素标记化的探针就可在电场的作用下快速泳动并浓缩结合于该处。同样的道理，可以使待检的DNA分子快速浓缩于此，从而有力地杂交反应迅速进行。杂交完成后，改变电场方向、可将未杂交的样品DNA从检测位点“洗”去，选择适当的电场强度就可以使非特异杂交的DNA与未杂交的探针选择性地从特定位点分开除去，而保留完全杂交的DNA

定 量 P C R

定量PCR 定义 以参照物为标准对PCR终产物进行分析或对PCR过程的进行监测，来评估样本中靶基因的拷贝数，称为定量PCR相对定量→绝对定量， 手工操作→自动化检测， 灵敏度与特异性多有很大的提高。 定量PCR的可行性 定量一般是在PCR扩增的指数期进行的。 特定的待扩增基因片段 起始含量越大，则指数扩增过程越短 当扩增速率趋于稳定后，则无论原来样品中起始模板含量多少，扩增片段的含量通常是一样的。 理想的扩增结果：Y=A×2n Y为扩增产物量 A代表PCR反应体中的原始模板数 n为扩增