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- 湖北省武汉市
- Pyrococcus abyssi cobD 重组蛋白表达
- 2025年11月24日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 服务名称：
大肠杆菌系统重组蛋白表达
- 提供商：
普健生物（武汉）科技有限公司
Uniprot号：Q9V2M8
基因名：cobD
蛋白名：Probable cobalamin biosynthesis protein CobD
蛋白别名：
Probable cobalamin biosynthesis protein CobD
服务内容：
| 服务项目 | 客户提供 | 服务内容 | 服务周期 | 交付内容 |
|---|---|---|---|---|
| 大肠杆菌系统 蛋白表达 |
基因序列 | 方案沟通 | 1天 | 方案报告 |
| 密码子优化和基因合成 | 5天 | 基因合成报告 | ||
| 表达纯化测试 | 3天 | 表达纯化测试报告 | ||
| 1L表达及纯化 | 3天 | 蛋白样品(3-5mg)及报告 | ||
| 放大发酵及纯化 | 7天 | 纯化的蛋白及报告 |
案例展示：
Q9V2M8相关研究文献：
1. An integrated analysis of the genome of the hyperthermophilic archaeon Pyrococcus abyssi.
2. Re-annotation of two hyperthermophilic archaea Pyrococcus abyssi GE5 and Pyrococcus furiosus DSM 3638.
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文献和实验一、Lighteningssembly Cloning Kit 传统克隆方法：引物设计合成、PCR、连入克隆载体、酶切获得插入片段，酶切获得线性载体，连接获得重组质粒。需酶切，引物设计受酶切位点限制；需连入克隆载体；步骤多，耗时长；效率低。 北京康碧泉公司代理的Gene-Foci试剂盒的克隆方法：引物设计合成、PCR获得插入片段，PCR或酶切获得线性载体，连接获得重组质粒。无需酶切，引物设计不受酶切位点限制；无需连入克隆载体；步骤少，速度快；高连接效率，高
TdT加尾效果；2）简单的5×加尾缓冲液；3）高度纯化的重组TdT，适合于5＇RACE用。另外，重新设计的扩增引物符合带有古细菌DNA聚合酶（含有3＇到5＇外切核酸酶活性）的长PCR聚合酶混合物的需要。由于5＇RACE系统的复杂性和单个基因特异性引物的使用（和锚定引物一起），使用Taq DNA聚合酶来扩增5＇末端片段长度受到限制，小于1.0kb。然而，最近PCR技术的进展使得可以PCR扩增的长度超过20kb。这种长PCR技术是基于在原来的热稳定聚合酶上，额外加有一定限量的带有3＇到5＇外切核酸
扩增是由许多不同来源的DNA聚合酶完成的。Saiki等（1985）描述过的最早PCR过程是用E.coli DNA聚合酶I的Klenow片段来完成的.由于这种酶热稳定性差,所以每一轮循环在变性和退火后需加入新酶。后来在PCR中引入耐热性的TaqE （Saiki et al. 1988）避免了这种烦琐的操作，使热循环部分的自动化成为可能。TaqE 没有3`-5`外切酶校正功能,所以错误掺入率为2×10-4,而且在3`端引入非模板互补核苷酸A,从而克隆时需用T-vector。rpfu DNA聚合酶亦称重组Pfu
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