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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
大量
- 英文名:
pETBlue-2
- 保质期:
1年
- 供应商:
再康生物
- 保存条件:
低温运输,-20℃保存
质粒编号: 60908-2761
质粒名称: pETBlue-2
其他名称:
质粒大小(bp): 3653
抗性: Ampicillin
质粒类型: Bacterial Expression
是否病毒: Nonviral
启动子:
稳转或瞬转: Transient
组成型或诱导性: Constitutive
表达水平: High
蛋白标签: His (Cterm), HSV (Cterm)
测序引物:
GenBank号:
其他属性:
| Notes: |
Blue/white identification; unique MCS; His and HSV tagged
|
|---|
质粒图谱:
| Feature Name | Start | End | |
|---|---|---|---|
| T7_promoter | 1 | 19 | |
| lacO | 19 | 46 | |
| M13_pUC_fwd_primer | 188 | 210 | |
| T7_transl_en_RBS | 254 | 270 | |
| rrnB_terminator | 619 | 776 | |
| rrnB_T1_terminator | 742 | 785 | |
| rrnB_T2_terminator | 917 | 944 | |
| T7_Terminal_primer | 1016 | 998 | |
| Ampicillin | 2526 | 1666 | |
| pBR322_origin | 2603 | 3222 |
| ORF | Start | End | |
|---|---|---|---|
| ORF frame 3 | 2526 | 1666 |
| Enzyme Name | Cut |
|---|---|
| XbaI | 47 |
| BglII | 223 |
| NheI | 235 |
| NcoI | 276 |
| EcoRV | 285 |
| SmaI | 290 |
| XmaI | 288 |
| SacI | 297 |
| BamHI | 301 |
| EcoRI | 307 |
| AscI | 320 |
| PstI | 330 |
| AatII | 336 |
| SalI | 335 |
| KpnI | 345 |
| ClaI | 348 |
| BstBI | 359 |
| HindIII | 362 |
| NotI | 369 |
| EagI | 369 |
| PvuII | 379 |
| PmlI | 389 |
| XhoI | 431 |
| PacI | 464 |
| AgeI | 3599 |
质粒序列:
| 1 | taatacgact | cactataggg | gaattgtgag | cggataacaa | ttcccctcta | 50 |
| 51 | gacttacaat | ttccattcgc | cattcaggct | gcgcaactgt | tgggaagggc | 100 |
| 101 | gatcggtacg | ggcctcttcg | ctattacgcc | agcttgcgaa | cggtgggtgc | 150 |
| 151 | gctgcaaggc | gattaagttg | ggtaacgcca | ggattctccc | agtcacgacg | 200 |
| 201 | ttgtaaaacg | acggccagcg | agagatcttg | attggctagc | agaataattt | 250 |
| 251 | tgtttaactt | taagaaggag | atataccatg | gcgatatccc | gggagctcgt | 300 |
| 301 | ggatccgaat | tctgtacagg | cgcgcctgca | ggacgtcgac | ggtaccatcg | 350 |
| 351 | atacgcgttc | gaagcttgcg | gccgcacagc | tgtatacacg | tgcaagccag | 400 |
| 401 | ccagaactcg | ctcctgaaga | cccagaggat | ctcgagcacc | accaccacca | 450 |
| 451 | ccactaatgt | taattaagtt | gggcgttgta | atcatagtca | taatcaatac | 500 |
| 501 | tcctgactgc | gttagcaatt | taactgtgat | aaactaccgc | attaaagcta | 550 |
| 551 | ttcgatgata | agctgtcaaa | catgataatt | cttgaagacg | aaagggccta | 600 |
| 601 | ggctgataaa | acagaatttg | cctggcggca | gtagcgcggt | ggtcccacct | 650 |
| 651 | gaccccatgc | cgaactcaga | agtgaaacgc | cgtagcgccg | atggtagtgt | 700 |
| 701 | ggggtctccc | catgcgagag | tagggaactg | ccaggcatca | aataaaacga | 750 |
| 751 | aaggctcagt | cgaaagactg | ggcctttcgt | tttatctgtt | gtttgtcggt | 800 |
| 801 | gaacgctctc | ctgagtagga | caaatccgcc | gggagcggat | ttgaacgttg | 850 |
| 851 | cgaagcaacg | gcccggaggg | tggcgggcag | gacgcccgcc | ataaactgcc | 900 |
| 901 | aggcatcaaa | ttaagcagaa | ggccatcctg | acggatggcc | tttttgcgtt | 950 |
| 951 | tctacaaact | cttttgttta | tttttctaaa | tacattcaaa | tatgtatccg | 1000 |
| 1001 | ctgagcaata | actagcataa | ccccttgggg | cctctaaacg | ggtcttgagg | 1050 |
| 1051 | ggttttttgc | tgaaaggagg | aactatatcc | ggattggcga | atgggacgcg | 1100 |
| 1101 | ccctgtagcg | gcgcattaag | cgcggcgggt | gtggtggtta | cgcgcagcgt | 1150 |
| 1151 | gaccgctaca | cttgccagcg | ccctagcgcc | cgctcctttc | gctttcttcc | 1200 |
| 1201 | cttcctttct | cgccacgttc | gccggctttc | cccgtcaagc | tctaaatcgg | 1250 |
| 1251 | gggctccctt | tagggttccg | atttagtgct | ttacggcacc | tcgaccccaa | 1300 |
| 1301 | aaaacttgat | tagggtgatg | gttcacgtag | tgggccatcg | ccctgataga | 1350 |
| 1351 | cggtttttcg | ccctttgacg | ttggagtcca | cgttctttaa | tagtggactc | 1400 |
| 1401 | ttgttccaaa | ctggaacaac | actcaaccct | atctcggtct | attcttttga | 1450 |
| 1451 | tttataaggg | attttgccga | tttcggccta | ttggttaaaa | aatgagctga | 1500 |
| 1501 | tttaacaaaa | atttaacgcg | aattttaaca | aaatattaac | gtttacaatt | 1550 |
| 1551 | tctggcggca | cgatggcatg | agattatcaa | aaaggatctt | cacctagatc | 1600 |
| 1601 | cttttaaatt | aaaaatgaag | ttttaaatca | atctaaagta | tatatgagta | 1650 |
| 1651 | aacttggtct | gacagttacc | aatgcttaat | cagtgaggca | cctatctcag | 1700 |
| 1701 | cgatctgtct | atttcgttca | tccatagttg | cctgactccc | cgtcgtgtag | 1750 |
| 1751 | ataactacga | tacgggaggg | cttaccatct | ggccccagtg | ctgcaatgat | 1800 |
| 1801 | accgcgagac | ccacgctcac | cggctccaga | tttatcagca | ataaaccagc | 1850 |
| 1851 | cagccggaag | ggccgagcgc | agaagtggtc | ctgcaacttt | atccgcctcc | 1900 |
| 1901 | atccagtcta | ttaattgttg | ccgggaagct | agagtaagta | gttcgccagt | 1950 |
| 1951 | taatagtttg | cgcaacgttg | ttgccattgc | tacaggcatc | gtggtgtcac | 2000 |
| 2001 | gctcgtcgtt | tggtatggct | tcattcagct | ccggttccca | acgatcaagg | 2050 |
| 2051 | cgagttacat | gatcccccat | gttgtgcaaa | aaagcggtta | gctccttcgg | 2100 |
| 2101 | tcctccgatc | gttgtcagaa | gtaagttggc | cgcagtgtta | tcactcatgg | 2150 |
| 2151 | ttatggcagc | actgcataat | tctcttactg | tcatgccatc | cgtaagatgc | 2200 |
| 2201 | ttttctgtga | ctggtgagta | ctcaaccaag | tcattctgag | aatagtgtat | 2250 |
| 2251 | gcggcgaccg | agttgctctt | gcccggcgtc | aatacgggat | aataccgcgc | 2300 |
| 2301 | cacatagcag | aactttaaaa | gtgctcatca | ttggaaaacg | ttcttcgggg | 2350 |
| 2351 | cgaaaactct | caaggatctt | accgctgttg | agatccagtt | cgatgtaacc | 2400 |
| 2401 | cactcgtgca | cccaactgat | cttcagcatc | ttttactttc | accagcgttt | 2450 |
| 2451 | ctgggtgagc | aaaaacagga | aggcaaaatg | ccgcaaaaaa | gggaataagg | 2500 |
| 2501 | gcgacacgga | aatgttgaat | actcatactc | ttcctttttc | aatcatgacc | 2550 |
| 2551 | aaaatccctt | aacgtgagtt | ttcgttccac | tgagcgtcag | accccgtaga | 2600 |
| 2601 | aaagatcaaa | ggatcttctt | gagatccttt | ttttctgcgc | gtaatctgct | 2650 |
| 2651 | gcttgcaaac | aaaaaaacca | ccgctaccag | cggtggtttg | tttgccggat | 2700 |
| 2701 | caagagctac | caactctttt | tccgaaggta | actggcttca | gcagagcgca | 2750 |
| 2751 | gataccaaat | actgtccttc | tagtgtagcc | gtagttaggc | caccacttca | 2800 |
| 2801 | agaactctgt | agcaccgcct | acatacctcg | ctctgctaat | cctgttacca | 2850 |
| 2851 | gtggctgctg | ccagtggcga | taagtcgtgt | cttaccgggt | tggactcaag | 2900 |
| 2901 | acgatagtta | ccggataagg | cgcagcggtc | gggctgaacg | gggggttcgt | 2950 |
| 2951 | gcacacagcc | cagcttggag | cgaacgacct | acaccgaact | gagataccta | 3000 |
| 3001 | cagcgtgagc | tatgagaaag | cgccacgctt | cccgaaggga | gaaaggcgga | 3050 |
| 3051 | caggtatccg | gtaagcggca | gggtcggaac | aggagagcgc | acgagggagc | 3100 |
| 3101 | ttccaggggg | aaacgcctgg | tatctttata | gtcctgtcgg | gtttcgccac | 3150 |
| 3151 | ctctgacttg | agcgtcgatt | tttgtgatgc | tcgtcagggg | ggcggagcct | 3200 |
| 3201 | atggaaaaac | gccagcaacg | cggccttttt | acggttcctg | gccttttgct | 3250 |
| 3251 | ggccttttgc | tcacatgttc | tttcctgcgt | tatcccctga | ttctgtggat | 3300 |
| 3301 | aaccgtatta | ccgcctttga | gtgagctgat | accgctcgcc | gcagccgaac | 3350 |
| 3351 | gaccgagcgc | agcgagtcag | tgagcgagga | agccggcgat | aatggcctgc | 3400 |
| 3401 | ttctcgccga | aacgtttggt | ggcgggacca | gtgacgaagg | cttgagcgag | 3450 |
| 3451 | ggcgtgcaag | attccgaata | ccgcaagcga | caggccgatc | atcgtcgcgc | 3500 |
| 3501 | tccagcgaaa | gcggtcctcg | ccgaaaatga | cccagagcgc | tgccggcacc | 3550 |
| 3551 | tgtcctacga | gttgcatgat | aaagaagaca | gtcataagtg | cggcgacgac | 3600 |
| 3601 | cggtgaattg | tgagcgctca | caattctcgt | gacatcataa | cgtcccgcga | 3650 |
| 3651 | aat | 3653 |
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文献和实验很多新手在问做原核表达需要考虑的载体和菌株的选择,现系统地解答一下,供新手借鉴。
菌来提供 T7 RNA 聚合酶。使用大肠杆菌启动子系统 ( 如 tac 、 lac 、 trc 、 pL) 有困难的许多基因已经在 pET 系统中稳定克隆和表达。 T7 RNA 聚合酶的选择性和活性使得几乎所有细胞资源都用于为目标基因表达。诱导后几小时目标产物就可超过细胞总蛋白的 50% 。 T7 驱动表达技术以 pETBlue TM 系统为代表。 pETBlue 载体包括了 pET 用于表达的优点,在目标基因克隆和质粒 DNA 操作的方面更为方便。 pETBlue TM 系统
In-Fusion Cloning with Vaccinia Virus DNA Polymerase
, which convert these noncovalently joined molecules into stable recombinants. We illustrate how this technology works by using, as an example, the cloning of the vaccinia N2L gene into the vector pETBlue-2.
。 因为NovaBlue中含有f’质粒,它是抗Tet的,加入1/1000的Tet可以提供一个竞争压力,才能使这个质粒不丢失,这个菌株才能在有Tet的培养基中生长。 NovaBlue编码Tet诱发的promoter的RNA polymerase,培养基中有Tet,而petBlue中的Tet诱发的promoter可以按其启动方向转录出lacZα肽,NovaBlue中又含有lacω肽。这样就可以用互补α筛选出重组菌。 Xgal和IPTG较贵,只涂在培养基的表面
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