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- 2025年11月21日
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文献和实验我根据分子克隆上的经典方法提取M13噬菌体单链DNA，第一次就成功。但是随后几次，试剂和方法都一样，在可以看见噬菌体白色沉淀的基础上（量足够多），却怎么也提不出来，最后乙醇沉淀时，一片空白。请求各位大侠指点迷津。谢谢 ! 既然首先可以成功，说明方法肯定没问题。建议： 1、检查你的试剂有无污染； 2、操作有无问题（虽然可能性小，但有时很难想到的）； 3、也可以换用其他方法，做个对照。 推荐一个快速的用NaI法噬菌体DNA提取的方法，是NEB公司噬菌体展示
斑的方法是用Xgal蓝色噬菌斑试验。有些噬菌体载体的中间片段带有编码β半乳糖苷酸的基因。当这种噬菌体感染lac宿主细胞并在含有Xgal（5溴4氯3吲哚βD半乳糖苷）的培养基上生长时，半乳糖苷酸与Xgal反应的产物为不溶性的靛蓝染料。因此，含有中间片段的重新恢复的噬菌体形成蓝色噬菌斑；而同外源DNA连接的重组噬菌体形成的噬菌斑是无色透明的。 （二）单链噬菌体载体 最常用的单链噬菌体载体是M13和它的改建噬菌体。M13是丝状噬菌体，有长约6500个核苷酸的闭环DNA基因组。M13附着在大肠杆菌的F
丝状噬菌体的基因与蛋白质丝状噬菌体(filamentousphage)是一类大肠杆菌的噬菌体，细丝状，直径约6nm，长度约1um。用于噬菌体肽库展示的主要是Ff组的M13、f1、fd等噬菌体，这3类噬菌体的亲缘关系十分密切，核酸序列有98％以上的同源性，病毒粒子的大小和结构非常相似，生活周期也相同。这些噬菌体为雄性特异性噬菌体，只能感染有F性因子或F，因子的雄性大肠杆菌菌株，但噬菌体的基因组能够转化无F因子的大肠杆菌。噬菌体基因组为环状单链DNA分子，野生型噬菌体则由6 408个核苷酸组成
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