- ¥1490
- 再康生物
- ZK-0019425
- 国产/进口
- 2025年11月20日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
20
- 英文名：
Carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae(R-Kp)
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海再康生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
Carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae(R-Kp). PCR Kit
本产品包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液，浓度为2×。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，可最大限度的减少人为误差。使用时只需加入DNA模板和引物既可。使用方便快捷，能避免PCR操作过程中的污染，使用时只需取适量2×TaqPCR MasterMix溶液，加入模板和引物，并加入去离子水补足体积，使MasterMix溶液浓度为1×即可进行反应。使用前请保证充分溶解并混匀，操作需在冰上进行。
Taq：扩增效率最高的耐热 DNA 聚合酶，其扩增速度约为 1-2kb/min。扩增碱基出错率为 10-5 左右。其产物未端带有 A，可直接用于 TA 克隆。
Pfu：目前保真度最高的耐热 DNA 聚合酶，碱基出错率为 10-6，但扩增效率低于 Taq 酶， 一般能很好的扩增 2kb 以下的片段。其扩增速度约为 500bp/min 左右。其产物为平未端，须加 A后才可用于 TA 克隆。
Taq Plus：Taq 和 Pfu 的等比混合物。集扩增效率高和保真度好于一身。扩增效率比 Pfu 高， 保真度比 Taq 好。其扩增速度约为 1000bp/min 左右。其产物未端带有 A，可直接用于 TA 克 隆。 含染料 PCR MasterMix 反应完后可以直接电泳检测。不含染料的 PCR MasterMix 反应完后 加入上样缓冲液后电泳检测。
| 产品名称 | 方法 | 规格 | 价格 |
| 抗碳青霉烯肺炎克雷伯菌LAMP试剂盒 | LAMP | 50次 | 2490元 |
| 抗碳青霉烯肺炎克雷伯菌PCR试剂盒 | PCR | 50次 | 1490元 |
| 抗碳青霉烯肺炎克雷伯菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 染料法 | 50次 | 2490元 |
| 抗碳青霉烯肺炎克雷伯菌探针法荧光定量PCR试剂盒 | 探针法 | 50次 | 3490元 |
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增抗碳青霉烯肺炎克雷伯菌，与其他微生物没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。
规格及成分
| 成分 | 编号 | 十孔盒包装 |
| PCR MagicMix 3.0 | 试剂一 | 1 mL（红盖） |
| 超纯水 | 试剂二 | 1 mL（亮黄色） |
| 抗碳青霉烯肺炎克雷伯菌PCR引物混合液 | 试剂三 | 100 μL（白盖） |
| 抗碳青霉烯肺炎克雷伯菌PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL） |
试剂四 | 50 μL（黄盖） |
| 核酸释放剂（试用装） | 试剂五 | 20 次（1 mL，绿盖） |
| 使用手册 | 试剂六 | 1 份 |
自备试剂：样品 DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送20 次核酸释放剂试用装，其使用手册可以从本公司网站订购核酸释放剂。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求的样品起始量）中加 10μL 补骨脂 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：
| 成分 | N+2 个样品管 | PCR 阴性对照 | PCR 阳性对照 |
| PCR MagicMix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
| 抗碳青霉烯肺炎克雷伯菌PCR引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| N+2 个样品 DNA 模板 | 各 18 μL | -- | -- |
| PCR 阴性对照（水） | -- | 18 μL | -- |
| PCR 阳性对照（抗碳青霉烯肺炎克雷伯菌PCR阳性对照的 1000 倍稀释液） |
-- | -- | 18 μL |
- 按下表设置 PCR 反应：
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
| PCR 反应（35 个循环） | 95℃ | 15 sec |
| 57℃ | 15 sec | |
| 72℃ | 40 sec | |
| 最后延伸 | 72℃ | 10 min |
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
抗碳青霉烯肺炎克雷伯菌PCR试剂盒常见问题与解决方法:
| 常见问题 | 可能原因 | 解决方法 |
阳性对照、待测样本均无条带。 |
PCR反应体系或反应条件不合适。 | 使用梯度PCR摸索PCR反应条件。 |
| PCR试剂保存不当失去活性。 | 2× PCR Mix应保存于-20℃，使用时避免反复冻融。若使用频繁，可在4℃短时间存放。 | |
| 引物设计问题。 | 尝试重新设计引物进行检查。 | |
阳性对照有目的条带，待测样本无条带或条带弱。 |
不当储存或长期储存引起试剂活性丧失。 | 使用新鲜的试剂。 |
| 加入组织裂解液过量。 | 增大反应体系，或减少裂解液的用量。 | |
| 样本裂解混合液保存不当或保存时间过久，DNA基因组已经降解。 | 裂解混合液液可在4℃保存2-3天，尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。 | |
| 模板加入量不适合。 | 在反应体系10-20%范围内优化模板加入量。反应效性能较差时，可以降模板浓度调节到低于10%的范围。 | |
| PCR循环数不足。 | 适当增加PCR的循环数，推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂，一般PCR反应要比用纯化的 DNA模板多5-10个循环为佳。 | |
非特异性扩增 |
PCR退火温度太低，循环数、引物浓度或模板浓度太高。 | 增加PCR退火温度，降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。 |
| PCR引物错配。 | 重新设计PCR引物。 | |
| 配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。 | PCR反应体系的配制在低温下进行，配制完成后尽快进行PCR扩增反应。 | |
阴性对照出现目的条带 |
操作工具或试剂污染。 | 实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。 |
| 样本间交叉污染。 | 每个取样器只对一个样本使用；或取完一个样本后，将取样器刃口浸入2%的次中，反复涮洗，然后用干净的纸巾擦干残液。 |
特别提示：本公司的所有产品仅用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
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文献和实验等中发现了此类变异的细菌。携带了这一耐药基因的细菌能够产生一种酶，名叫新德里一号金属酶，英文缩写为NDM-1，而它恰恰能水解和破坏大多数抗生素，使之失效。 关注肠杆菌科细菌耐药 既然产NDM-1菌株主要来源于肠杆菌科细菌，顾兵认为，这足以证实了耐碳青霉烯类抗生素的肠杆菌科细菌已成为一个全球性问题。 肠杆菌科细菌主要包括大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌等，也是引起医院感染最常见的病原菌。 据2009年度卫生部全国细菌耐药监测（Mohnarin）结果，大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分离率为革兰
类水解能力存在较大差异，一般根据分子结构分为A、B、C、D四大类，其中B类酶在其活性部位结合有锌离子，因此又称为金属β－内酰胺酶。其水解底物包括青霉素类、头孢菌素类和碳青霉烯类等，表现为产酶细菌对这些药物广泛耐药。金属β－内酰胺酶首先在铜绿假单胞菌、不动杆菌中发现。近年来，在肠杆科细菌，如大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌等中也有发现。迄今为止已经确定的金属β－内酰胺酶除NDM－1外，还包括IMP、VIM、GIM、SIM、SPM等型别。 最早报道的产NDM－1细菌为肺炎克雷伯菌，于2008年在一位印度裔
。而且，产生AmpC酶的菌株不被β-内酰胺酶 抑制剂抑制。如果同时拌有孔蛋白基因突变或特定的外排泵的过表达，产AmpC酶菌株还可以耐碳青霉烯类药物。染色体介导的AmpCβ-内酰胺酶主要存在肠杆菌，枸橼酸杆菌，沙雷和其他一些革兰阴性细菌中，通常表达水平低，但可被青霉素类，碳青霉烯类，和一些头孢类如头孢西丁诱导高水平表达。III和IV代头孢菌素不诱导AmpC酶，但他们可以被水解；质粒介导的AmpC酶可以在细菌之间传播，主要存在于临床分离的肺炎克雷伯菌和大肠杆菌中。目前CLSI还没有确认的AmpC酶表型确证试验
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