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㊣Annexin Ⅴ凋亡检测试剂盒
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发育凋亡早期，膜磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin Ⅴ是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin Ⅴ被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。在细胞发育凋亡时，膜磷脂酰丝氨酸外翻的发生早于细胞核的变化。因为细胞坏死时也会发生膜磷脂酰丝氨酸外翻，所以Annexin Ⅴ常与鉴定细胞死活的核酸染料（如PI）合并使用，来区分凋亡细胞与死亡细胞。
Bender公司拥有Annexin Ⅴ的专利权，可提供各种规格的Annexin Ⅴ凋亡检测试剂。其中Annexin ⅤFITC试剂盒中包含FITC标记的Annexin Ⅴ及PI，此凋亡试剂盒质优价廉，且有小包装，适于检测小样本的客户；
以Annexin Ⅴ FITC试剂盒为例进行以下说明：
10X Annexin V Binding Buffer (100 ml)试剂盒组份：
● FITC标记的Annexin Ⅴ
● PI染料（20ug/ml）
● 结合缓冲液
注意事项：
● 保证细胞的状态，避免出现过多的死亡细胞
● 操作过程避免过度用力，以免出现机械性细胞死亡
● 使用去离子水准备所需溶液
● 2-4℃避光保存试剂盒
● 使用一次性吸头，避免出现交叉污染
10X Annexin V Binding Buffer (100 ml)基本操作
● 按照既定程序诱导细胞凋亡
● 按照 说 明 书 配制所需容溶液
● 讲细胞悬浮在1×结合缓冲液中，浓度调整为2-5×10５/ml
● 将细胞悬浮液和FITC标记Annexin Ⅴ混合，温室孵育10分钟
● 离心，PBS洗涤细胞；使用1×结合缓冲液重悬细胞
● 使用PI染色细胞（终浓度为1ug/ml）
● 使用流式细胞仪分析
10X Annexin V Binding Buffer (100 ml)
zk-hxbz-035 人胃癌细胞 MKN-28 规格25毫升/株.
zk-hxbz-036 人胃癌细胞 (+)9811 规格25毫升/株.
zk-hxbz-038 人胃癌细胞 9811C11 规格25毫升/株.
zk-hxbz-039 绿色荧光蛋白标记人胃癌细胞 MGC803-GFP 规格25毫升/株.
编号 中文 英文名称 规格25毫升/株.
zk-hxbz-040 人胃癌细胞 BGC-803 规格25毫升/株.
zk-hxbz-041 人胃癌顺铂耐药株 SGC7901/DDP 规格25毫升/株.
zk-hxbz-042 人结肠癌细胞 CRL-2780 规格25毫升/株.
zk-hxbz-043 人胚胎肠粘膜细胞 CCC-HIE-2 规格25毫升/株.
zk-hxbz-044 人结肠癌细胞 CACO-2 规格25毫升/株.
zk-hxbz-045 人结肠癌细胞 Colo205 规格25毫升/株.
zk-hxbz-046 人结肠癌细胞 Colo320DM 规格25毫升/株.
zk-hxbz-047 人结直肠癌细胞 HCT116 规格25毫升/株.
zk-hxbz-048 人结肠腺癌细胞 HCT-8 规格25毫升/株.
zk-hxbz-049 耐长春新碱结肠癌细胞系 HCT-8/VCR 规格25毫升/株.
zk-hxbz-050 人结肠腺癌细胞 HT-29 规格25毫升/株.
zk-hxbz-051 人十二指肠腺癌细胞 HuTu-80 规格25毫升/株.
zk-hxbz-052 人结肠癌细胞 Loo 规格25毫升/株.
zk-hxbz-053 人结肠癌细胞 SW480 规格25毫升/株.
zk-hxbz-054 人结肠癌细胞 SW620 规格25毫升/株.
zk-hxbz-055 人结肠癌细胞 T84 规格25毫升/株.
zk-hxbz-056 人结肠癌细胞 Lovo 规格25毫升/株.
zk-hxbz-057 结直肠癌细胞 LOVE1 规格25毫升/株.
zk-hxbz-058 人结肠癌细胞 Ls-174-T 规格25毫升/株.
zk-hxbz-059 人结肠癌细胞 LS174T 规格25毫升/株.
zk-hxbz-060 人结肠癌细胞 CW-2 规格25毫升/株.
zk-hxbz-061 人结肠癌细胞 RKO 规格25毫升/株.
zk-hxbz-062 人结肠癌转基因细胞 RKO-AS45-1 规格25毫升/株.
zk-hxbz-063 人结肠癌转基因细胞 RKO-E6 规格25毫升/株.
zk-hxbz-064 人大肠癌细胞 CL187/CCL187 规格25毫升/株.
zk-hxbz-065 人大肠癌细胞 SW116 规格25毫升/株.
zk-hxbz-066 人大肠癌细胞 PA319 规格25毫升/株.
zk-hxbz-067 人盲肠腺癌细胞（未分化） Hce-8693 规格25毫升/株.
zk-hxbz-068 人结直肠腺癌细胞 HCT-15 规格25毫升/株.
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文献和实验时样本之间干扰。 Q：说明书上写细胞量为 1~5 × 105 ，细胞量多的话对检测结果有没有影响？ A：建议细胞量最多不要超过 106个，过量的细胞相当于染料被稀释，影响染色和分离效果。一般 2×105 个细胞足够进行凋亡检测了，通常情况下检测 10,000 个细胞就能得到比较好的结果。 Q：是否可以用 PBS 替代凋亡试剂盒里面的 Binding Buffer？ A：不行，Binding Buffer 是必须要加的，Annexin V 与 PS 的结合依赖 Ca2+，Binding
10X TBE BUFFER 3 Liters 324 g Tris base 165g Boric acid 120mls 0.5M EDTA (pH 8.0) autoclave for 20 min 2 Liters 216g Tris base 110g Boric acid 80mls 0.5M EDTA (pH 8.0) autoclave
染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。因此将Annexin-V与PI匹配使用，就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。方法1、悬浮细胞的染色：将正常培养和诱导凋亡的悬浮细胞（0.5~1×106）用PBS洗2次，加入100ul Binding Buffer和FITC标记的Annexin-V（20ug/ml）10ul,室温避光30min,再加入PI（50ug/ml）5ul,避光反应5min后，加入400ul Binding Buffer，立即
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