Collagen, Type I (5mg/ml), fro

Collagen, Type I (5mg/ml), from rat tail 鼠尾胶原蛋白I（5mg/ml）产品描述
胶原蛋白（Collagen）是结缔组织和内脏器官外基质的主要成分，但在皮肤、肌腱、骨骼中分布最为广泛。胶原蛋白在结构和遗传学上被分为不同类型，I型胶原蛋白（Collagen, Type I）结构上是由2个α1链和1个α2链组成的异源多聚体，在37℃中性条件下可形成3股螺旋结构，被广泛用于多种细胞的培养基质，如肝细胞、纤维细胞、脊髓神经节、雪旺氏细胞等。另外，I型胶原蛋白在细胞生长、分化、迁移和组织形态的发生等方面也具有重要应用。
翊圣生物提供的鼠尾肌腱胶原蛋白I（rat tail tendon collagen type I）根据Birkedal-Hansen方法，经过 醋 酸（HAc）抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备所得，可用于制备三维胶，模拟细胞真实的生长环境；也可以用于包被组织培养皿表面，提高细胞表面粘附性，比如培养角质形成细胞、肝细胞等原代细胞。
本品溶于6mM HAc溶液，浓度为5mg/ml，无菌，经严格质控测定，可成功制备三维胶或包被基质以促进细胞生长。
运输和保存方法
冰袋运输。4℃保存，有效期1年。不可冻存。
注意事项
1） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2） 整个操作请于冰上进行，因室温下鼠尾胶原I可迅速成胶。
3） 整个操作请在无菌环境下无菌操作，避免污染以影响细胞生长。
Collagen, Type I (5mg/ml), from rat tail 鼠尾胶原蛋白I（5mg/ml）使用说明
1. 薄层包被（Thin coating）的制备
【注意】：组织培养器皿的推荐包被浓度为1-5µg/cm²，起始浓度可首 选5µg/cm²。建议根据具体的细胞培养系统进行优化。
1.1 HAc稀释液的制备
本品以溶于6mM HAc的溶液形式提供，本身不溶于中性pH，因可用6mM HAc溶液做进一步稀释。
配置方法：取34.5µl 冰 醋 酸（17.4M）加入100ml细胞培养级双蒸水，混匀后即得到6mM HAc溶液，0.22µm滤膜过滤除菌后待用。
1.2 包被步骤
a，根据设计的实验体系，计算最终包被浓度下需要的I型胶原总量；
b，用6mM醋 酸 溶 液将胶原I（5mg/ml）稀释到合适的中间浓度，比如当包被浓度为5µg/cm²，可将胶原稀释到50µg/ml，对于35mm培养皿（表面积为9 m²），加入900µl 50µg/ml胶原溶液即可；比如当包被浓度为2µg/cm²，可将胶原稀释到12µg/ml，对于35mm培养皿（表面积为9 cm²），加入1.5ml 20µg/ml胶原溶液即可；一定要确保胶原溶液完全覆盖表面。可参考附表1 不同培养皿下加入胶原体积对应表。
c，室温孵育1h，小心吸去多余的液体。用无菌PBS或无血清培养基清洗3-4次后直接使用。或者加完胶原溶液后，开盖后在超净台内过夜晾干。
Collagen, Type I (5mg/ml), from rat tail 鼠尾胶原蛋白I（5mg/ml）【注】：包被好的器皿在4-8℃，无菌条件下至少可保存3个月以上的时间。
2、三维胶原的制备
【注意】建议制备三维胶原模型，成胶浓度控制在1~2mg/ml之间。因本品以溶于6mM醋酸的溶液形式提供，需要先用0.1M NaOH中和 pH值，才能促使成胶实现。
【注意】请在实验前，将所有需要试剂和耗材：10×PBS或10×培养液，0.1M NaOH，双蒸水，以及离心管，枪头置于冰上遇冷，所有溶液和耗材都要无菌。
2.1．三维胶原（无细胞）的制备（以配制1ml，1mg/ml三维胶为例）：
a，取200µl鼠尾胶原蛋白I型 (5mg/ml)加到提前冰浴的离心管内，加入688µl无菌水。之后加到12µl 0.1M NaOH（注意：该步骤顺序不能反，如果反过来把12µl 0.1M NaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。再加入100µl 10×PBS（初次使用建议选择含酚红）或10×培养液，混匀后立即加到培养器皿中，混匀后得到的pH为7.0左右。
b，将培养器皿在室温(25℃左右)下放置20min待胶凝固后，转移到培养箱内。【注】：如果配制中使用的10×PBS，需要在做细胞培养前，先加入适当体积的细胞培养液预平衡。
2.2．三维胶原（含细胞）的制备（以配制1ml，1mg/ml三维胶为例）：
a，准备好细胞悬液，并放置于冰浴中。
b，将200µl鼠尾胶原蛋白I型 (5mg/ml)加到0.1M NaOH（注意：该步骤顺序不能反，如果反过来把12µl 0.1M NaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。再加入28µl 10×PBS（初次使用建议选择含酚红）混匀或者10×培养液，混匀（pH为7.0左右）。再加入760ul的细胞悬浮液，混匀后立即加到培养器皿中。
c，将培养器皿在室温(25℃左右)放置20min待胶凝固后，加入适当体积的细胞培养液，转移到培养箱中培养。
Collagen, Type I (5mg/ml), from rat tail 鼠尾胶原蛋白I（5mg/ml）
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