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上海再康
小鼠(Mouse)白细胞介素17(IL-17)ELISA 检测试剂盒
本试剂仅供研究使用 标本:组织匀浆
试验原理:
IL-17试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知IL-17浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将IL-17和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中IL-17的活性浓度呈比例关系。
小鼠(Mouse)白细胞介素17(IL-17)ELISA 检测试剂盒试剂盒内容及其配制
| 试剂盒成份(2-8℃保存) | 96孔配置 | 48孔配置 | 配制 |
| 96/48份酶标板 | 1块板(96T) | 半块板(48T) | 即用型 |
| 塑料膜板盖 | 1块 | 半块 | 即用型 |
| 标准品:800pg/ml | 1瓶(0.6ml) | 1瓶(0.3ml) | 按 说 明 书 进行稀稀 |
| 空白对照 | 1瓶(1.0ml) | 1瓶(0.5ml) | 即用型 |
| 标准品稀释缓冲液 | 1瓶(5ml) | 1瓶(2.5ml) | 即用型 |
| 生物素标记的抗IL-17抗体 | 1瓶(6ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
| 亲和链酶素-HRP | 1瓶(10ml) | 1瓶(5.0ml) | 即用型 |
| 洗涤缓冲液 | 1瓶(20ml) | 1瓶(10ml) | 按 说 明 书 进行稀释 |
| 底物A | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
| 底物B | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
| 终止液 | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
自备材料
1. 蒸馏水。
2. 加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3. 振荡器及磁力搅拌器等。
安全性
1. 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
2. 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
小鼠(Mouse)白细胞介素17(IL-17)ELISA 检测试剂盒操作注意事项
1. 试剂应按标签 说 明 书 储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2. 实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
3. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4. 使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
5. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6. 洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7. 底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8. 加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9. 按照 说 明 书 中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
样品收集、处理及保存方法
1、 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
小鼠(Mouse)白细胞介素17(IL-17)ELISA 检测试剂盒试剂的准备
1. 标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:
| 800pg/ml | (6号标准品) | 原倍浓度不用稀释直接加入50ul。 |
| 400pg/ml | (5号标准品) | 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液 |
| 200pg/ml | (4号标准品) | 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
| 100pg/ml | (3号标准品) | 100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
| 50pg/ml | (2号标准品) | 100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
| 25pg/ml | (1号标准品) | 100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
| 0pg/ml | (空白对照) | 原始浓度不用稀释直接加入50ul。 |
2. 洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。
操作步骤
1. 使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
3. 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
4. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
5. 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
6. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
8. 取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
9. 在450nm波长处测定各孔的OD值。
建议使用的实验方案
| 标准品浓度(pg/ml) | ||||||||||||
| A | 800 | 800 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 |
| B | 400 | 400 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 |
| C | 200 | 200 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 |
| D | 100 | 100 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 |
| E | 50 | 50 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 |
| F | 25 | 25 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 |
| G | 0 | 0 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 |
| H | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 |
局限
6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到精确的结果。
试剂盒性能
1. 灵敏度:最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性:不与人其它细胞因子反应。
3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%。
结果 判 断 与 分 析
1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的IL-17标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的IL-17含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
3、检测值范围:0-800pg/ml
4、敏感度: 1.0pg/ml
ZK-EL-R0119c 大鼠骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA试剂盒 说 明 书 Rat BMP-7 (Bone Morphogenetic Protein 7) ELISA Kit
ZK-EL-R0120c 大鼠骨成型蛋白受体1A(BMPR1A)ELISA试剂盒 说 明 书 Rat BMPR1A (Bone Morphogenetic Protein Receptor, type IA) ELISA Kit
ZK-EL-R0121c 大鼠骨成型蛋白受体Ⅱ(BMPR2)ELISA试剂盒 说 明 书 Rat BMPR2 (Bone Morphogenetic Protein Receptor Ⅱ) ELISA Kit
ZK-EL-R0124c 大鼠血管舒缓激肽(BK)ELISA试剂盒 说 明 书 Rat BK (Bradykinin) ELISA Kit
ZK-EL-R0125c 大鼠促血管生成素2(ANG2)ELISA试剂盒 说 明 书 Rat ANG2 (Angiopoietin 2) ELISA Kit
ZK-EL-R0126c 大鼠脑钠素(BNP)ELISA试剂盒 说 明 书 Rat BNP (Brain Natriuretic Peptide) ELISA Kit
ZK-EL-R0128c 大鼠胸肾表达趋化因子(BRAK)ELISA试剂盒 说 明 书 Rat BRAK (Breast And Kidney Expressed Chemokine) ELISA Kit
ZK-EL-R0130c 大鼠血管内皮钙黏蛋白(VE-Cadherin)ELISA试剂盒 说 明 书 Rat VE-Cadherin (Vascular Endothelial Cadherin) ELISA Kit
ZK-EL-R0132c 大鼠神经钙黏蛋白(NCAD)ELISA试剂盒 说 明 书 Rat NCAD (Neural Cadherin) ELISA Kit
ZK-EL-R0133c 大鼠钙调磷酸酶结合蛋白1(CABIN1)ELISA试剂盒 说 明 书 Rat CABIN1 (Calcineurin Binding Protein 1) ELISA Kit
ZK-EL-R0134c 大鼠钙调磷酸酶(CaN)ELISA试剂盒 说 明 书 Rat CAN (Calcineurin) ELISA Kit
ZK-EL-R0135c 大鼠降钙素基因相关肽(CGRP)ELISA试剂盒 说 明 书 Rat CGRP (Calcitonin Gene Related Peptide) ELISA Kit
ZK-EL-R0136c 大鼠β乳球蛋白 (β-Lg)ELISA试剂盒 说 明 书 Rat β-Lg (Beta-Lactoglobulin) ELISA Kit
ZK-EL-R0137c 大鼠钙敏感受体(CASR)ELISA试剂盒 说 明 书 Rat CASR (Calcium Sensing Receptor) ELISA Kit
ZK-EL-R0138c 大鼠钙/钙调素依赖性蛋白激酶2(CAMK2)ELISA试剂盒 说 明 书 Rat CAMK2 (Calcium/Calmodulin-Dependent Protein Kinase-Ⅱ) ELISA Kit
ZK-EL-R0139c 大鼠小肠碱性磷酸酶(ALPI)ELISA试剂盒 说 明 书 Rat Alkaline Phosphatase, Intestinal (ALPI) ELISA Kit
ZK-EL-R0140c 大鼠钙调素(CAM)ELISA试剂盒 说 明 书 Rat CAM (Calmodulin) ELISA Kit
ZK-EL-R0141c 大鼠钙联蛋白(CNX)ELISA试剂盒 说 明 书 Rat CNX (Calnexin) ELISA Kit
ZK-EL-R0142c 大鼠钙网蛋白(CRT)ELISA试剂盒 说 明 书 Rat CRT (Calreticulin) ELISA Kit
ZK-EL-R0143c 大鼠钙结合蛋白(CR)ELISA试剂盒 说 明 书 Rat CR (Calretinin) ELISA Kit
ZK-EL-R0144c 大鼠钙腔蛋白(CALU)ELISA试剂盒 说 明 书 Rat CALU (Calumenin) ELISA Kit
ZK-EL-R0145c 大鼠糖缺失性转铁蛋白(CDT)ELISA试剂盒 说 明 书 Rat CDT (Carbohydrate-Deficient Transferrin) ELISA Kit
ZK-EL-R0146c 大鼠碳 酸 酐酶1(CA1)ELISA试剂盒 说 明 书 Rat CA1 (Carbonic Anhydrase I) ELISA Kit
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