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10000
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海再康
- 保存条件:
室温保存
产品包装:试剂盒组成 D1800-50 D1800-100 储存条件
RNase A 1ml 2ml -20℃
蛋白酶K 1ml 2ml -20℃红细胞裂解液 120ml 120ml×2 RT
溶液A 15ml 2 5ml RT溶液B 15ml 25ml RT一步法无内毒素质粒DNAout
漂洗液 15ml 15ml×2 RT洗脱液 15ml 30ml RT
吸附柱 50个 100个 RT收集管 50个 100个 RT 说 明 书 1份 1份 RT
注意事项:
1、本试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。
2、常用的血液抗凝剂有EDTA、ACD和肝素等,需注意的是,如欲制备大分子量血液基因组DNA,可优先考虑使用ACD抗凝。一般不使用肝素抗凝,因为用肝素抗凝的血液提取的基因组DNA进行PCR扩增时,有PCR扩增抑制现象。
3、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DN**段较小且提取量也下降。
4、如果试剂盒中的溶液出现沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响效果。
5、绝大多数哺乳动一步法无内毒素质粒DNAout物的全血如人全血中的红细胞无核,故在提取基因组DNA时需去除不含DNA的无核红细胞,以免影响白细胞裂解和DNA释放。如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量减少为5-20ul,不需要再用红细胞裂解液来裂解红细胞。
6、洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul,体积过小会影响回收效率;洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的 pH值调至此范围),pH值低于7.0会降低洗脱效率。
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文献和实验一步法提取质粒DNA主要用于鉴定阳性克隆。 主要步骤如下: 收集1.5mL菌体,彻底除去培养基; 加入50ulSTE缓冲液重悬菌体; 加入50ul酚:氯仿;异戊醇(25:24:1),混匀; 12000rpm离心5分钟,取上清到另一离心管中; 加入NH4Ac至终浓度2M,并加入2倍体积的乙醇,混匀,室温或冰上放置几分钟; 12000rpm离心5分钟,弃上清,75%乙醇清沉淀; 沉淀干后,以水或TE缓冲液溶解,便
CRISPR/Cas9 基因敲除实验-- sgRNA 及引物设计
来看一下。提交订单,等待引物到达:华大基因的速度非常快,大约在 2 - 3 个工作日即可拿到,在等待期间需要准备好:LB + 抗生素抗性平板;感受态细胞及相应培养基;无内毒素的 Cas9 载体质粒;BbsI 限制性内切酶;质粒小提试剂盒;常规限制性内切酶。
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