pCMV-N-YFP (黄色荧光蛋白)
pCMV-N-YFP是再康生物自行研发的哺乳动物细胞表达质粒,用于表达N端含YFP(Yellow Fluorescent Protein, 黄色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的前面有一个YFP的完整编码序列,因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有YFP标签的融合蛋白。利用YFP的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位,也可以利用YFP抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。YFP与GFP高度相似,可以尝试用GFP抗体检测YFP。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可以使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-N-YFP质粒的主要信息如下:
| Feature Nucleotide |
Position |
| CMV promoter |
1-602 |
| T3 promoter and T3 primer binding site |
620-639 |
| YFP |
677-1393 |
| Multiple cloning site |
1394-1483 |
| T7 promoter and T7 primer binding site |
1503-1524 |
| SV40 polyA signal |
1536-1919 |
| f1 origin of ss-DNA replication |
2057-2363 |
| bla promoter |
2388-2512 |
| SV40 promoter |
2532-2870 |
| Neomycin/kanamycin resistance ORF |
2905-3696 |
| HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal |
3697-4155 |
| pUC origin |
4284-4951 |
pCMV-N-YFP质粒(5003bp)的图谱如下:
pCMV-N-YFP的多克隆位点的详细图谱如下:
| SacIYFP |
| |
| 651 |
GAGCTCTAGC |
GCTACCGGTC |
|
TGAGCAAGGG |
|
| |
| |
CTCGAGATCG |
CGATGGCCAG |
|
ACTCGTTCCC |
|
| |
| 701 |
TTCACCGGGG |
TGGTGCCCAT |
CCTGGTCGAG |
CTGGACGGCG |
|
| |
| |
AAGTGGCCCC |
ACCACGGGTA |
GGACCAGCTC |
GACCTGCCGC |
|
| |
| 751 |
CCACAAGTTC |
AGCGTGTCCG |
GCGAGGGCGA |
GGGCGATGCC |
|
| |
| |
GGTGTTCAAG |
TCGCACAGGC |
CGCTCCCGCT |
CCCGCTACGG |
|
| |
| 801 |
AGCTGACCCT |
GAAGTTCATC |
TGCACCACCG |
GCAAGCTGCC |
|
| |
| |
TCGACTGGGA |
CTTCAAGTAG |
ACGTGGTGGC |
CGTTCGACGG |
|
| |
| 851 |
CCCACCCTCG |
TGACCACCTT |
CGGCTACGGC |
GTGCAGTGCT |
|
| |
| |
GGGTGGGAGC |
ACTGGTGGAA |
GCCGATGCCG |
CACGTCACGA |
|
| |
| 901 |
CCCCGACCAC |
ATGCGCCAGC |
ACGACTTCTT |
CAAGTCCGCC |
|
| |
| |
GGGGCTGGTG |
TACGCGGTCG |
TGCTGAAGAA |
GTTCAGGCGG |
|
| |
| 951 |
GCTACGTCCA |
GGAGCGCACC |
ATCTTCTTCA |
AGGACGACGG |
|
| |
| |
CGATGCAGGT |
CCTCGCGTGG |
TAGAAGAAGT |
TCCTGCTGCC |
|
| |
| 1001 |
ACCCGCGCCG |
AGGTGAAGTT |
CGAGGGCGAC |
ACCCTGGTGA |
|
| |
| |
TGGGCGCGGC |
TCCACTTCAA |
GCTCCCGCTG |
TGGGACCACT |
|
| |
| 1051 |
GCTGAAGGGC |
ATCGACTTCA |
AGGAGGACGG |
CAACATCCTG |
|
| |
| |
CGACTTCCCG |
TAGCTGAAGT |
TCCTCCTGCC |
GTTGTAGGAC |
|
| |
| 1101 |
TGGAGTACAA |
CTACAACAGC |
CACAACGTCT |
ATATCATGGC |
|
| |
| |
ACCTCATGTT |
GATGTTGTCG |
GTGTTGCAGA |
TATAGTACCG |
|
| |
| 1151 |
AAGAACGGCA |
TCAAGGTGAA |
CTTCAAGATC |
CGCCACAACA |
|
| |
| |
TTCTTGCCGT |
AGTTCCACTT |
GAAGTTCTAG |
GCGGTGTTGT |
|
| |
| 1201 |
CAGCGTGCAG |
CTCGCCGACC |
ACTACCAGCA |
GAACACCCCC |
|
| |
| |
GTCGCACGTC |
GAGCGGCTGG |
TGATGGTCGT |
CTTGTGGGGG |
|
| |
| 1251 |
GCCCCGTGCT |
GCTGCCCGAC |
AACCACTACC |
TGAGCTACCA |
|
| |
| |
CGGGGCACGA |
CGACGGGCTG |
TTGGTGATGG |
ACTCGATGGT |
|
| |
| 1301 |
AGCAAAGACC |
CCAACGAGAA |
GCGCGATCAC |
ATGGTCCTGC |
|
| |
| |
TCGTTTCTGG |
GGTTGCTCTT |
CGCGCTAGTG |
TACCAGGACG |
|
| |
| BamHIHindIII |
|
| |
| 1351 |
GACCGCCGCC |
GGGATCACTC |
TCGGCATGGA |
CGAGCTGTAC |
|
| |
| |
CTGGCGGCGG |
CCCTAGTGAG |
AGCCGTACCT |
GCTCGACATG |
|
| |
| PstIEcoRIEcoRVSalIBglIIXhoIXbaISpeI |
|
| |
| 1401 |
AGCTTCTGCA |
GGAATTCGAT |
ATCGTCGACA |
GATCTCTCGA |
GTCTAGAACT |
| |
| |
TCGAAGACGT |
CCTTAAGCTA |
TAGCAGCTGT |
CTAGAGAGCT |
CAGATCTTGA |
| |
| ApaI |
| |
| 1451 |
AGTGGGCCCG |
GTACCTTAAT |
TAATTAAGGT |
ACC |
| |
| |
TCACCCGGGC |
CATGGAATTA |
ATTAATTCCA |
TGG |
pCMV-N-YFP中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-YFP)包括:
| AclI |
AflII |
AhdI |
AscI |
AsiSI |
BaeI |
BbvCI |
| BlpI |
BmgBIv |
BsiWI |
BsmBI |
BspEI |
BspQI |
BssHII |
| BstEII |
BstXI |
BstZ17I |
EarI |
EarI |
EcoNI |
FseI |
| NotI |
NruI |
PflMI |
PmeI |
PmlI |
PpuMI |
PshAI |
| PspXI |
SacII |
SapI |
SbfI |
ScaI |
SgrAI |
SmaI |
| SwaI |
TspMI |
XcmI |
XmaI |
XmnI |
|
|
pCMV-N-YFP中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-YFP once)包括:
| NdeI |
CA`TA,TG |
240 |
|
ApaI |
G,GGCC`C |
1454 |
| SnaBI |
TAC|GTA |
346 |
|
PvuI |
CG,AT`CG |
1534 |
| CspCI |
,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` |
382 |
|
BclI |
T`GATC,A |
1690 |
| NheI |
G`CTAG,C |
597 |
|
MfeI |
C`AATT,G |
1783 |
| BmtI |
G,CTAG`C |
597 |
|
HpaI |
GTT|AAC |
1796 |
| SacI |
G,AGCT`C |
651 |
|
MluI |
A`CGCG,T |
1919 |
| Eco53kI |
GAG|CTC |
653 |
|
BsaXI |
,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN` |
2080 |
| AfeI |
AGC|GCT |
660 |
|
DraIII |
CAC,NNN`GTG |
2146 |
| AgeI |
A`CCGG,T |
664 |
|
SfiI |
GGCCN,NNN`NGGCC |
2805 |
| BcgI |
,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN` |
765 |
|
StuI |
AGG|CCT |
2854 |
| BsrGI |
T`GTAC,A |
1386 |
|
ClaI |
AT`CG,AT |
2873 |
| BamHI |
G`GATC,C |
1394 |
|
BspDI |
AT`CG,AT |
2873 |
| HindIII |
A`AGCT,T |
1400 |
|
EagI |
C`GGCC,G |
2939 |
| PstI |
C,TGCA`G |
1406 |
|
KasI |
G`GCGC,C |
3032 |
| EcoRI |
G`AATT,C |
1412 |
|
PluTI |
G,GCGC`C |
3032 |
| EcoRV |
GAT,ATC |
1420 |
|
NarI |
GG`CG,CC |
3033 |
| SalI |
G`TCGA,C |
1424 |
|
SfoI |
GGC|GCC |
3034 |
| AccI |
GT`MK,AC |
1425 |
|
MscI |
TGG|CCA |
3115 |
| BglII |
A`GATC,T |
1430 |
|
PflFI |
GACN`N,NGTC |
3151 |
| BsoBI |
C`YCGR,G |
1436 |
|
Tth111I |
GACN`N,NGTC |
3151 |
| PaeR7I |
C`TCGA,G |
1436 |
|
BsrDI |
GCAATG,NN` |
3264 |
| AvaI |
C`YCGR,G |
1436 |
|
RsrII |
CG`GWC,CG |
3549 |
| XhoI |
C`TCGA,G |
1436 |
|
BstBI |
TT`CG,AA |
3715 |
| XbaI |
T`CTAG,A |
1442 |
|
BsaI |
GGTCTCN`NNNN, |
4022 |
| SpeI |
A`CTAG,T |
1448 |
|
ApaLI |
G`TGCA,C |
4637 |
| PspOMI |
G`GGCC,C |
1454 |
|
PciI |
A`CATG,T |
4951 |
pCMV-N-YFP质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
N-YFP primer (1284-1303): 5'-GCTACCAGTCCGCCCTGAGC-3'
T7 primer (1503-1524): 5'-GTAATACGACTCACTATAGGGC-3'
pCMV-N-YFP的全序列信息:D2716 pCMV-N-YFP-seq.txt
pCMV-N-mCherry质粒转染细胞后的表达效果请参考图1。
图1. pCMV-N-YFP质粒转染细胞后的表达效果图。左侧为明场照片,右侧为荧光照片。
包装清单:
| 产品编号 |
产品名称 |
包装 |
| ZK-2716-1μg |
pCMV-N-YFP (黄色荧光蛋白) |
1μg |
| ZK-2716-100μg |
pCMV-N-YFP (黄色荧光蛋白) |
100μg |
| — |
说 明 书 |
1份 |
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注意事项:
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