pUCm-T载体

pUCm-T载体

pUCm-T载体(pUCm-T Vector)是用于克隆含有A末端PCR产物的理想载体。可以通过蓝白斑筛选有插入片段的重组克隆。
很多DNA聚合酶在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA每条链的3'端加上一个突出的碱基A。pUCm-T载体是一种已经线性化的载体，载体每条链的3'端带有一个突出的T。这样，pUCm-T载体的两端就可以和PCR产物的两端进行正确的AT配对，在连接酶的催化下，就可以把PCR产物连接到pUCm-T载体中，形成含有目的片段的重组载体。

pUCm-T载体的主要信息如下:
Base pairs	2773
Lac Z promoter	142-171
M13/pUC Reverse Primer	204-221
Lac Z	222-534
Multiple cloning region	233-376
M13/pUC Sequencing Primer	378-395
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region	972-1832
ColE1 origin of replication(rep)	1987-2606

pUCm-T载体的图谱如图1：

图1. pUCm-T载体图谱示意图

pUCm-T载体的多克隆位点的详细序列如下(请特别注意其中的Pst I不是单酶切位点)：

			Lac Z
201	ACACAGGAAA	CAGCTATGAC	CATGATTACG	CCAAGCTTGC	ATGCCTGCAG
	TGTGTCCTTT	GTCGATACTG	GTACTAATGC	GGTTCGAACG	TACGGACGTC
	Xba I Xho I BamH I Bgl II
251	GTCGACTCTA	GACTCGAGGG	ATCCAGATCT	CCAGTCTT GA	CCTGGTCTGC
	CAGCTGAGAT	CTGAGCTCCC	TAGGTCTAGA	GGTCAGA TCT	GGACCAGACG
Pst I Not I Nco I EcoR V Cla I Nde I T7 promoter
301	AGGCGGCCGC	CCATGGGATA	TCATCGATCA	TATGTCGC CC   TATAGTGAGT
	TCCGCCGGCG	GGTACCCTAT	AGTAGCTAGT	ATACAGCG GG   ATATCACTCA
Kpn I Sac I EcoR I
351	CGTATTACGG	TACCGAGCTC	GAATTCACTG	GCCGTCGTTT	TACAACGTCG
	GCATAATGCC	ATGGCTCGAG	CTTAAGTGAC	CGGCAGCAAA	ATGTTGCAGC

pUCm-T载体中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pUCm-T)包括：

Afl II	Age I	Apa I	Asc I	Avr II	Bbs I	Bbv II	Bcl I
Blp I	BsaA I	BseR I	Bsg I	BsiC I	BsiW I	Bsm I	BsmF I
Bsp120 I	BspM II	BsrG I	BssH II	Bst1107 I	BstB I	BstE II	BstX I
Bsu36 I	Dra III	Eco47 III	Eco72 I	Esp I	Fse I	Hpa I	Mlu I
Msc I	Mun I	Nae I	NgoM I	Nhe I	Nru I	Nsi I	PflM I
Pme I	Pml I	PpuM I	PspA I	Rsr II	Sac II	Sfi I	Sma I
SnaB I	Spe I	Spl I	Srf I	Stu I	Xca I	Xma I

pUCm-T载体中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pUCm-T once)包括：

HinD IIIA`AGCT,T234Acc65 IG`GTAC,C360BspM IACCTGC 10/14239Asp718G`GTAC,C360Sph IG,CATG`C244Kpn IG,GTAC`C364Sal IG`TCGA,C252Ban IIG,RGCY`C370Acc IGT`MK,AC253Sac IG,AGCT`C370HinC IIGTY|RAC254Apo IR`AATT,Y372Hind IIGTY|RAC254EcoR IG`AATT,C372Xba IT`CTAG,A258Kas IG`GCGC,C533Ava IC`YCGR,G264Nar IGG`CG,CC534PaeR7 IC`TCGA,G264Ehe IGGC|GCC535Xho IC`TCGA,G264Bbe IG,GCGC`C537BamH IG`GATC,C270EcoO109 IRG`GNC,CY780BsaB IGATNN|NNATC275Aat IIG,ACGT`C841Bgl IIA`GATC,T276Ssp IAAT|ATT955Xcm ICCANNNN,N`NNNNTGG289Xmn IGAANN|NNTTC1160Tth111 IGACN`N,NGTC293Bsp1286 IG,DGCH`C1177Not IGC`GGCC,GC305Sca IAGT|ACT1279Eag IC`GGCC,G305EcoN ICCTNN`N,NNAGG1399Xma IIIC`GGCC,G305Cfr10 IR`CCGG,Y1675Dsa IC`CRYG,G312Bsa IGGTCTC 7/111694Nco IC`CATG,G312Ahd IGACNN,N`NNGTC1760Sty IC`CWWG,G312AlwN ICAG,NNN`CTG2239EcoR VGAT|ATC320Afl IIIA`CRYG,T2648Cla IAT`CG,AT325Sap IGCTCTTC 8/112765

pUCm-T载体的全序列信息： D2006 pUCm-T vector-seq.txt
pUCm-T载体是在pUC19载体的基础上改造而成，除多克隆位点外，其余序列同pUC19(GenBank Accession Number
M77789)。
少量自连的载体转化得到的克隆由于编码了LacZ基因，而在IPTG/X-Gal平板上呈现蓝色。大部分重组的载体，由于插入片段破坏了LacZ基因，因而在IPTG/X-Gal平板上转化得到白色克隆。这样就可以通过蓝白斑非常容易地筛选出重组克隆，蓝白斑筛选结果示意图如图2。

图2. pUCm-T载体的蓝白斑筛选结果示意图。pUCm-T载体和PCR产物片段进行连接，转化后在IPTG/X-Gal平板的上长出的克隆，其中白色克隆代表PCR产物片段可能插入到pUCm-T载体中，但后续还需要酶切、PCR或者测序确认。

对于重组的质粒可以使用载体多克隆位点上的两个PstI酶切位点进行PstI单酶切鉴定，也可以使用廉价且高效的EcoRI、
BamHI、XbaI、HindIII等内切酶进行双酶切鉴定。
构建完成的质粒可以通过质粒上的正反两个M13引物位点进行测序或通过T7 promoter上的T7引物位点进行测序。
构建完成的质粒可以利用T7 RNA polymerase promoter进行体外转录，用于探针标记等。
一个包装的本载体共可以进行20次连接反应。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
ZK-2006	pUCm-T载体	20μl
—	说 明 书	1份

保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
本质粒未经再康生物书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
DNA聚合酶是否可以在PCR产物3'端加A需参考该DNA聚合酶的说明。对于PCR产物为平端的情况，不适合用于T载体的连接反应。对于平端的PCR产物可以先进行在3'端加A的反应，再用T载体进行克隆。
进行PCR产物克隆时需自备连接、转化等相关试剂、试剂盒。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。