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产品概述
One-Step Multiplex RT-qPCR Master Mix(ONE TUBE) 是 RNA 全预混 RT-qPCR 专用预混液,适用于以 RNA 为模板的单重或多重定量 PCR 检测。在反应过程中,逆转录和定量 PCR 在一管内完成,简化了实验操作。本产品支持引物探针提前预混,配置成工作液后,低温下可长期保存,后续使用时直接加入样本核酸即可。本产品使用 UDG-dUTP 防污染措施,能有效防止扩增产物气溶胶污染的风险。本产品可兼容快速程序,可缩短检测时间。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| One-Step Multiplex RT-qPCR Master Mix(ONE TUBE) | HMD3913-01 | 100rxn |
| HMD3913-02 | 1000rxn | |
| HMD3913-03 | 5000rxn |
注意事项
1.在实验过程中请使用 RNase free 耗材。
2.引物设计相关建议/要求:
| 类别 | 建议/要求 |
| 长度 | 18-30个碱基较为合适; |
| GC含量 | 40-60% |
| Tm值 | 1.常规引物设计软件均可以给出Tm值(推荐 使用Oligo 7); 2.简单的Tm值计算公式为:Tm=4℃*(G+C) +2℃*(A+T); 3.建议正向和反向引物Tm值尽量接近; 4.建议引物设计Tm值在55-60℃内,提高退 火温度可以增加PCR试剂的特异性。 |
| 引物设 计 |
1.建议PCR扩增产物长度在70-200bp之间; 2.尽量避免在模板的二级结构区域内设计引 物 ; 3.避免正向和反向引物3'端形成2个或以上 的互补碱基以减少引物二聚的形成; 4.引物3'端不能有多于3个连续的G或者C, 引物3'端末端碱基不能为T; 5.引物自身不应存在互补序列,否则引物自身 会折叠成发夹状结构; |
3. 探针设计相关建议/要求:
| 类别 | 建议/要求 |
| 长度 | 18-30个碱基较为合适 |
| 探针设计 | 1.探针建议使用HPLC级别以上纯化,否则残 留的未结合荧光染料会造成荧光本底升高从 而降低检测的灵敏度; 2.探针5'端应避免使用碱基G; 3.探针建议Tm值在65-70℃; 4.如探针中含有突变,尽量控制在两端,不要 在探针中部存在突变。 5.探针尽量不要存在二级结构,如必须有,须 控制探针Loop环Tm值<40℃。 |
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文献和实验Two-Step RT-PCR protocol We will provide both one-step and two-step protocols for RT -PCR . We recommend the two-step protocol for this class. In the one-step protocol, the components of RT and PCR are mixed in a single tube
This protocol uses C. therm. Polymerase One-Step RT-PCR system from Roche. 1. Setup master mix 1: 25 mM dNTP 0.8 m l DMSO
Single tube confirmation PCR protocol
(200mg/l). - Incubate at 30°C for two to three days. *This step reduces background by eliminating aborted transformants. 2. Zymolyase treatment - Transfer a small portion of a well-isolated colony (~1 mm) into 50 µl solution
技术资料暂无技术资料 索取技术资料










