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- 迈嘉赫
- T0502-60-Giga
- 2025年11月18日
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一、产品简介
迈嘉赫两步法质粒提取试剂盒是专为高效、快速、高通量、 自动化提取转染级质粒而设计的一款创新产品。本产品采用纳米级质粒提取磁珠、特有的内毒素去除试剂，搭配迈嘉赫自研的高通量、 自动化质粒提取仪器，可实现 500μg 、1mg 、3mg 和 6mg 规模的质粒提取，质粒内毒素含量低于 0.05EU/μg。解决了质粒手工提取过程中需要反复加液、柱子堵流速慢、需要高速离心和手工溶解质粒、质粒得率低、无法实现高通量和自动化等痛点。无需离心、减少了人工操作带来的质粒污染、可在封闭的仪器内实现加液和洗脱质粒的分装，在 60 分钟内能够实现 6-24 个不同规模的样品质粒提取和分装，人效可提高 2~3 倍，大大提升了效率，节约了时间和人工成本。
二、试剂盒组成
|
名称 |
规格 |
数量 |
|
P1 |
1000mL/瓶 |
2 瓶 |
|
P2 |
1000mL/瓶 |
2 瓶 |
|
P3 |
1000mL/瓶 |
2 瓶 |
|
磁珠 A |
1000mL/瓶，15mg/mL |
2 瓶 |
|
磁珠 B |
960mL/瓶，5mg/mL |
1 瓶 |
|
QC |
1000mL/瓶 |
5 瓶 |
|
QE |
1000mL/瓶 |
5 瓶 |
|
Elution |
1000mL/瓶 |
3 瓶 |
|
W2 |
1000mL/瓶 |
5 瓶 |
|
洗脱液 |
250mL/瓶 |
1 瓶 |
|
备注：RNase A 、异丙醇需要客户自己准备 |
||
三、操作流程
3.1 实验前准备
（1）客户自备 RNase A ，根据自有工艺，将 RNase A 加入 P1 中配成一定的浓度，混匀 5min ，4℃储存，备用；
（2）客户需自备异丙醇；
（3）为保证实验稳定性，所有试剂使用前恢复到室温，并且手动摇匀后再使用。
3.2 质粒提取（以 1mg 质粒提取规模为例）
3.2.1 菌泥裂解
（1）裂解工艺
|
质粒摇菌体积（ml） |
含 RNase A 的 p1（ml） |
p2（ml） |
p3（ml） |
ER（ml） |
|
30-50ml |
10 |
10 |
10 |
0 |
（2）裂解步骤
a. 离心收菌，获得菌泥；
b. 加 P1：加入 10mL 含 RNase A 的 p1，旋涡混匀，使得菌泥充分重悬分散；
c. 加 P2: 加入 10mL P2 ，手动缓慢上下颠倒 10 次，然后静置 4min；
d. 加 P3：加入 10mL P3 ，手动缓慢上下颠倒 10 次，然后静置 4min；
e. 离心后过滤收集上清；
3.2.2 质粒提取（1mg 规模）
（1）试剂用量
|
磁珠 A (mg) |
裂解上清(ml) |
QC(ml) |
QE(ml) |
Elution(ml) |
异丙醇(ml) |
磁珠 B 用量(mg) |
W2(ml) |
洗脱液（ml） |
|
145 |
20~28 |
20 |
20 |
16 |
8.9 |
15 |
20 |
1 |
备注：试剂用量可通过具体实验数据自行调整。
（2）仪器运行程序
现场已调试好，如有需求，可联系厂家仪器工程师进行修改。
四、注意事项
（1）P1 使用前需要加入 RNase A ，要保证 RNase A 的活性，否则会导致 RNA 残留，质粒浓度虚高；
（2）仪器运行前要检查仪器外挂的异丙醇量是否足够；
（3）仪器使用前，提前紫外照射 30-60min；
（4）仪器使用后，及时用 75%乙醇擦拭；
五、 产品信息
|
产品名称 |
产品货号 |
包装规格 |
|
两步法质粒超大提试剂盒 |
T0502-60-Giga |
1套/盒 |
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文献和实验zsutx2005 最近经常做转染，所以经常会提质粒。我们用的是Omega的去内毒中提，最后溶水也是用的Endotoxin-free Elution Buffer. 提好的质粒一般放-20备用。由于隔段时间就会用，所以就出现冻融的问题。每次解冻会发现管里的白色物质有析出。拿去测定浓度，发现质粒浓度会下降20%-30%左右，这样如果继续按照之前测定的浓度做转染，就会影响质粒的定量。不知道质粒为什么会析出？有谁碰到过这种情况？如果一直放在-4度，质粒降解的就很厉害
一、Lighteningssembly Cloning Kit 传统克隆方法：引物设计合成、PCR、连入克隆载体、酶切获得插入片段，酶切获得线性载体，连接获得重组质粒。需酶切，引物设计受酶切位点限制；需连入克隆载体；步骤多，耗时长；效率低。 北京康碧泉公司代理的Gene-Foci试剂盒的克隆方法：引物设计合成、PCR获得插入片段，PCR或酶切获得线性载体，连接获得重组质粒。无需酶切，引物设计不受酶切位点限制；无需连入克隆载体；步骤少，速度快；高连接效率，高
飞的 GeneArt™ Gibson Assembly® 克隆试剂盒系列为例，Gibson Assembly 实际上是生命科学狂人文特尔（就是那个敢单挑 6 国合力的国际人类基因组计划还占尽上风，逼得当时美国总统出面协调让双方合作并同时发表结果的）东山再起后成立的 Venter 研究所旗下 Gibson 博士开发的，里面包含了精心优化搭配的三种酶活性：外切酶会外切双链末端而产生单链 3’突出端，使得外源片段和线性化载体的互补末端能够退火，聚合酶活性会填补退火片段产生的缺口，连接酶活性能够在重组后进行连接。得到
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