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250g
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文献和实验一、用 IPTG 诱导启动子在大肠杆菌中表达克隆化基因所需特殊试剂:1M IPTG1. 将目的基因与 IPTG 诱导表达载体连接,构成重组质粒并转化相应的表达用的大肠杆菌。将转化体铺于含相应抗生素的 LB 平板,37℃ 培养过夜。通过酶切序列分析等筛选带有插入片段的转化体。2. 分别挑取对照菌和重组菌 1 个菌落,接种于 1 ml 含有相应抗生素的 LB 培养液中,37℃ 通气培养过夜。3. 取 100 微升过夜培养物接种于 5 ml 含有相应抗生素的 LB 培养液中(各 10 份),适当
用水。 (2)器材 无热原试管、无热原吸头。旋涡混合仪、移液器、多道移液器、封口膜、试管架。恒温水浴箱(37±1 ℃)、分光光度计。 注意:接触试剂及供试品的所有器皿必须是无热原的(我公司提供无热原耗材)。玻璃器皿可经250 ℃干烤至少60分钟去除热原。2. 供试品的贮存与预处理 备注: 若供试品为血液类,请参照我厂配套血液相关处理试剂使用说明书。 (1)供试品的pH值应在6 - 8之间,若超出此范围,需用无热原缓冲液、0.1 N氢氧化钠或0.1 N盐酸调节。 (2)若供试品中
的 2'-羟基基团。RNA 变性后有利于在转印过程中与硝酸纤维素膜结合,它同样可在高盐中进行转印,但在烘烤前与膜结合得并不牢固,所以在转印后不能用低盐缓冲液洗膜,否则 RNA 会被洗脱。在胶中不能加 EB,因它为影响 RNA 与硝酸纤维素膜的结合,为测定片段大小,可在同一块胶上加标记物一同电泳,之后将标记物胶切下,上色、照像。样品胶则进行 Northern 转印,标记物胶上色的方法是在暗室中将其浸在含 5 μg/ml EB 的 0.1mol/L 醋酸铵中 10 min,在水中就可脱色。在紫外光下用一次成像
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