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250g
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文献和实验,凝胶过滤层析主要可以分为以下三种方法 : ● 制备级凝胶过滤纯化:对于分辨率有较高的要求: (1)上样体积一般在柱体积的 0.5%~4% ; (2)运行较低的流速 ; (3)使用较高的柱子(一般 ≥ 60 cm)。 经过纯化后的样品将被直接置换到合适的缓冲液条件中,用于后续的实验或储存。 ● 分析型凝胶过滤层析:对于分辨率有很高的要求,上样体积一般在柱体积的 0.3%~0.5% ,使用柱子的高度一般为 30 cm。而在快速纯度检测和筛选实验中,常用的是 15 cm 柱高的柱子,可以在提供足够
纯度(色谱法) ≥98.0% 醇中溶解度(25℃) 1g试样全溶于10mL95%(V/V)乙醇中 熔点, ℃ 210-213℃ 灼烧残渣 ≤
体积的 0.5 M EDTA,以终止消化。然后用等体积酚抽提、等体积氯仿抽提,2.5 倍体积乙醇沉淀,少量 TE 溶解(参见 DNA 提取方法,但离心转速要提高到 12000 g,以防止小片段 DNA 的丢失)。如果需要两种酶消化 DNA,而两种酶的反应条件可以一致,则两种酶可同时进行消化;如果反应条件不一致,则先用需要低离子强度的酶消化,然后补加盐类等物质调高反应体系的离子强度,再加第二种酶进行消化。三、 基因组 DNA 消化产物的琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳是目前分离核酸片段最常用的方法,制备
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