BCIP/NBT 碱性磷酸酶底物液

碱性磷酸酶标记试剂的使用

前，底物液新鲜配制。加66ul NBT贮存液至10ml碱性磷酸酶缓冲液中，充分混合，加33ul BCIP贮存液，在1h内使用。 3. 将洗涤过的标本片放在一个适当的容器内。加足够量的底物液覆盖标本片(3～5ml适合于100mm平皿)。在室温中进行反应直到染色达到适当黑色。对一些试剂可在显微镜下定期监测。一般孵育时间大约是30min。 4. 在含有20mmol／LEDTA的PBS中漂洗以终止反应，螯合Mg2 。 5. 优化：如果需要，进行复染。

碱性磷酸酶的分离与纯化

一、实验目的 1.掌握酶分离纯化的一般步骤及相关原理； 2.悉碱性磷酸酶的分离纯化的方法步骤。 二、实验原理 有机溶剂分级沉淀是分离蛋白质的常用方法之一。有机溶剂能使许多溶于水的酌生物大分子发生沉淀，其主要作用是降低水溶液的介电常数。例如20℃时水的介电常数为80，82％的乙醇溶液的介电常数为40。溶液的介电常数降低意味着溶质分子间异性电荷库仑引力增加，从而使溶质的溶解度降低

地高辛（DIG）产品选择指南——选择检测方法

检测方法 对于探针和靶序列杂交之后的检测，我们通常使用碱性磷酸酶（AP）耦联的抗体，采用显色法或化学发光法检测。在碱性磷酸酶的底物中，我们使用CDP-Star或CSPD用于化学发光法检测，NBT/BCIP用于显色法检测。同时，对于膜杂交中的化学发光信号的检测，建议使用Lumi-Film以获得最理想的信号。 检测底物 即用型CDP