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- 英文名:
pLV3-U6-sgRNA-U6-sgRNA-Cas9-EGFP-Puro
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100
- 供应商:
科淼生物
- 规格:
0.5ug/0.5ug
| 规格: | 0.5ug | 产品价格: | ¥680.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 0.5ug | 产品价格: | ¥1280.0 |
英文名称:pLV3-U6-sgRNA-U6-sgRNA-Cas9-EGFP-Puro
货号:KM1082180
图谱:微客服
宿主:哺乳细胞,慢病毒
用途:基因编辑
片段类型:CRISPR
片段物种:空载体
原核抗性:Amp
真核抗性:Puro
荧光标记:绿色
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文献和实验的表达质粒。A)PCR 扩增的方法U6:来源于人 U6 小核启动子,常用小 RNA 表达,转录本为 shRNA。将 sgRNA 放到 U6 后面,利用 U6 的启动来扩增 sgRNA。将这部分内容整合到 Cas9 expression plasmid pSpCas9(Cas9 表达质粒)中,一起共转。B)sgRNA 表达质粒的方法现在我要用这个方法来举例设计 p53 引物找到包括 sgRNA 序列的前后 1000 个碱基的序列(2000 bp)找到的序列如下:将上面复制的序列粘贴到 blast 中
继续寻找合适成对 sgRNA 序列。04 根据找到的合适的 sgRNA 订购 oligo图为 U6 真核表达载体设计,Forward oligo:5'-ACGG, Reverse oligo:5'-AAAC。05 关于 cas9 的几个注意事项1)CRISPR-cas9 最主要的要求:PAM 序列为 NGG。2)sgRNA,即 cas9 guide RNA,是引导 cas9 蛋白在基因编辑位点进行定向切割,所以一般是 20 个碱基,不含 PAM 序列。3)设计的 sgRNA 一定有效吗?一般设计
and homologous recombination. These tools provide researchers with new instruments that accelerateboth forward and reverse genetics efforts. Key words Genome engineering , Cas9 , CRISPR , CRISPR-Cas9 , PAM , Guide RNA , sgRNA , DNA cleavage , Mutagenesis
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