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90天
- 英文名:
pCaEXP-GPR1(C. albicans)
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100
- 供应商:
科淼生物
- 规格:
0.5ug/0.5ug
| 规格: | 0.5ug | 产品价格: | ¥680.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 0.5ug | 产品价格: | ¥1280.0 |
英文名称:pCaEXP-GPR1(C. albicans)
货号:KM1060198
图谱:微客服
宿主:丝状真菌
用途:蛋白表达
片段类型:ORF
片段物种:人白色念珠菌
原核抗性:Amp
真核抗性:
荧光标记:
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文献和实验(1)用适当的限制酶消化质粒和外源DNA。如有必要,可用凝胶电泳分离片段并(或)用碱性磷酸酶处理质粒DNA。通过酚:氯仿抽提和乙沉淀来纯化DNA,然后用TE(pH7.6)溶液使其浓度为100/ml。 (2)按如下所述设立连接反应混合物: a.将0.1μl载体DNA转移到无菌微量离心管中,加等摩尔量的外源DNA。 b.加水至7.5μl,于45℃加温5分钟以使重新退炎的粘端解链,将混合物冷却到0℃。 c.加入:10xT4噬菌体DNA连接酶缓冲液 1μl T4噬菌体NDA
连接反应 (一)外源DNA和质粒载体的连接反应 外源DNA片段和线状质粒载体的连接,也就是在双链DNA5'磷酸和相邻的3'羟基之间 形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5'磷酸,可生成4个新的磷酸二酯链。但如果质粒DNA已去磷酸化,则吸能形成2个新的磷酸二酯链。在这种情况下产生的两个杂交体分子带有2个单链切口,当杂本导入感受态细胞后可被修复。相邻的5'磷酸和3'羟基间磷酸二酯键的形成可在体外由两种不同的DNA连接
片段2 [60fmol (~10ng)]C和F载体1 (60fmol)和外源插入片段3 (60fmol)D线状载体(5’-磷酸化)(60fmol)G环状载体[60fmol (~10ng)]1 载体DNA 已进行去磷酸化2 外源目的DNA 可以连接接头。3 连接反应中,质粒载体和插入的DNA 片段摩尔比一般为1:1。DNA 的总浓度应约为10ng/μl。(1)A、B和C管中加入:10×连接缓冲液 1.0μlT4噬菌体连接酶 0.5 Weiss单位5 mmol/L ATP
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