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-80℃
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90天
- 英文名:
pBiFC-ITGB1(human)-VN155(I152L)
- 库存:
100
- 供应商:
科淼生物
- 规格:
0.5ug/0.5ug
| 规格: | 0.5ug | 产品价格: | ¥680.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 0.5ug | 产品价格: | ¥1280.0 |
英文名称:pBiFC-ITGB1(human)-VN155(I152L)
货号:KM1069863
图谱:微客服
宿主:哺乳细胞
用途:双分子荧光
片段类型:BIFC
片段物种:人
原核抗性:Amp
真核抗性:
荧光标记:
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文献和实验连接酶 0.1Weiss单位 5mmol/L ATP 1μl 于16℃温育1-4小时 10xT4噬菌体DNA连接酶缓冲液 200mmol/L同Tris.Cl(pH7.6) 50mmol/K MgCl2 50mmol/L二硫苏糖醇 500μg/ml牛血清白蛋白(组分V.Sigma产品)(可用可不用) 该缓训液应分装成小份,贮存于-20℃。 另外,再设立两个对照反应,其中含有(1)只有质粒载体;(2)只有外源DNA片段。如果外源DNA量不足,每个
T4噬菌体DNA连接酶不同于大肠杆菌DNA连接酶,它可以催化平端DNA片段的连接(Sgaramella和Khorana,1972;Sgaramella和Ehrlich,1978),由于DNA很容易成为平端,所以这是一个极为有用的酶学物性。有了这样的物性,才能使任何DNA分子彼此相连。然而,相对而言,平端连接是低效反应,它要求以下4个条件: 1)低浓度(0.5mmol/L)的ATP(Ferretti和Sgaranekka,1981)。 2)不存在亚精胺一类的多胺。 3)极高
℃。 另外,再设立两个对照反应,其中含有(1)只有质粒载体;(2)只有外源DNA片段。如果外源DNA量不足,每个连接反应可用50-100ng质粒DNA,并尽可能多加外源DNA,同时保持连接反应体积不超过10μl。可用至少3种不同方法来测定T4噬菌体DNA连接酶的活性。大多数制造厂商(除New England Biolabs公司外)现在都用Weiss等,11968)对该酶进行标化。1个Weiss单位是指在37℃下20分钏内催化1mmol32P从焦磷酸根置换到[γ,β-32P]ATP所需酶时
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