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- 源叶
- 中国
- R28654-500ml
- 2025年10月29日
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文献和实验大肠杆菌亮氨酰-tRNA合成酶E292对于氨基酰化活性的作用
为pH 6.8的磷酸钾缓冲液50 mM-500mM。在HA-Ultrogel纯化中使用的线性洗脱梯度为pH 6.8的磷酸钾缓冲液20 mM-300 mM。 7) 收集的含LeuRS以及变种酶的洗脱峰，用PEG 20000浓缩，对10 mM pH 6.8的磷酸钾缓冲液透析。加入50% 0 o C预冷的甘油，保存于-20 o C。 3. 蛋白质浓度测定 粗抽液蛋白质的浓度用Bradford方法测定。纯化后的LeuRS以及变种酶的浓度可以通过以下公式计算
缓冲液中。Laemmli 缓冲液由 10% 甘油，0.2 mol/L Tris-HCl，pH 6.8，0.002% 溴酚蓝（Bio- Rad)，4% SDS， 5% β-巯基乙醇。 ( 3 ) 准备双向电泳：干燥的细胞核蛋白质组分在重悬缓冲液中再次溶解。重悬缓冲液含有 40 mmol/L Tris-HCl，2 mol/L 硫脲，7 mol/L 尿素，4% Triton X-100,100 mmol/L DTT，2% 载体两性电解质（Bio- Rad) ( pH 4~7 载体两性电解
乙酸和 0.07% β-巯基乙醇（2ME) （V/V ) 的丙酮（低温）。应在使用前新鲜配制，并置于 -20°C 条件下直到使用（见注释 1)。 注意：3 种试剂均有毒，必须在通风橱中配制。 2.2 清洗溶液 含 0.07% 2ME（V/V ) 的丙酮，可在 -20°C 下贮存约 1 个月。 2.3 R2D2 蛋白质溶解缓冲液 5 mol/L 尿素、2 mol/L 硫脲、2% 3- [ 3 - ( 胆酰胺丙基）二甲氨基 ] 丙磺酸内盐 ( CHAPS；m/V ) 、2%
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