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上海源叶生物科技有限公司
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文献和实验蛋白量再加10%即为最佳标记蛋白量。3、标记:胶体金与蛋白质(IgG)的结合 将胶体金和IgG溶液分别以0.1Mol/L K2CO3调pH至9.0,电磁搅拌IgG溶液,加入胶体金溶液,继续搅拌10min,加入一定量的稳定剂以防止抗体蛋白与胶体金聚合发生沉淀。常用稳定剂是5%胎牛血清(BSA)和1%聚乙二醇(分子量20KD)。加入的量:5%BSA使溶液终浓度为1%;1%聚乙二醇加至总溶液的1/10.在接近并略为高于蛋白质等电点的条件下标记是比较合适的,在此情况下蛋白质分子在金颗粒表面的吸附量最大
4冻干品用缓冲液稀释成约10000 cpm·100-1 ·u1-1。 (4) T4抗血清应用液 将T4抗血清(即抗体)冻干品按药盒要求的滴度稀释,放4℃冰箱备用。 (5) 免疫沉淀剂 用分子量6000的聚乙二醇(PEG)60 g溶解于缓冲溶液中,使体积为200 m1即30% PEG溶液,放4 ℃冰箱备用。 [ 仪器 与器械] γ-计数仪、微量加样器及塑料吸头(50 ?l,100 ?l
4. 1%聚乙二醇(PEG,分子量20KD); 5. 0.05mol/L,pH9.0硼酸盐缓冲液; 6. 10% NaCl溶液; 7. 超速离心机。 操作方法 1. 待标记蛋白质前处理:将待标记蛋白溶液预先对0.05mol/L ,pH7.0 NaCl 4℃透析过夜,去除多余的盐离子,再经10000g 4℃离心1h,去除聚合物。 2. 胶体金溶液的前处理:胶体金对蛋白质的吸附主要取决于pH值,在接近蛋白质的等电点或略偏碱的pH条件下,二者容易形成牢固
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