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文献和实验偶联物,最大限度的提高了信噪比。图2. CF染料的超强特异性;由于AF染料制备过程中含有大量带负电的磺化基团,容易非特异性结合正电基团,请看AF790 Dye与CF790的条带特异性对比。3. 优异的标记效率生物偶联后的活性染料一般很容易水解,会在运输,操作及储存中带来诸多不便,最终致染料结合效率低下。像Alexa Fluor® dyes,DyLight? dyes and IRDyes®等严重的磺化作用有较强的吸湿性,恶化水解作用等问题。例如: AlexaFluor® 488 在应用时琥珀酰亚胺脂酯
沉淀:长期低温保存的蛋白质或4℃较长时间保存的抗体,特别是在浓度高于2mg/ml的情况下,很容易形成聚合物,聚合物对标记过程及免疫金探针的稳定性有一定影响,因此,标记之前须离心以除去这些聚合物。一般以100000r/min 4℃离心60min取上清液,调整蛋白质浓度至1mg./ml即可用于标记。二、胶体金pH值的调整胶体金与蛋白质的结合成功与否,取决于pH值,一般只有在蛋白质等电点(PI)略偏碱的条件下二者才能牢固地结合,因此,标记之前须将胶体金溶液的pH值调至待标记蛋白质的等电点略偏碱。需要提高
%1mg/9g细胞Rho1D4 IAC+SECOR131-2 G蛋白偶联受体可诱导的HEK293S细胞系(哺乳动物)90%2.9mg/10g细胞Rho1D4 IAC, +centrifugationhOR17-4 G蛋白偶联受体可诱导的HEK293S细胞系(哺乳动物)90%7.5mg/2.5L, 培养物Rho1D4 IAC+SEChOR17-4 G蛋白偶联受体无细胞小麦胚芽提取物70%*0.3mg/mL, 反应溶液*Rho1D4 IAC+SECCD81 四次跨膜
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