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- Sigma
- 进口
- T5575-25MG
- 2025年10月24日
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RT
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见标签
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联硕生物
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25MG
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文献和实验Northern杂交试验指导手册－为制备RNA探针模板的DNA片断亚克隆
A． 载体选择 为了获得能够在体外转录RNA探针的DNA模板，其克隆载体必须带有可供选择的特异转录启动子，同时，为了获得理想的Northern杂交试验结果，载体选择带有两种不同类型而方向相反启动子的载体，以便在RNA探针制备时同时得到两条链的转录探针。 常用的这类载体有：pGEM-3/pGEM-4 ( 2.87kb, SP6/T7 ). pGEM-3Z ( 2.74kb, T7/SP6 ). PGEM-3Zf(-) (3.2kb, T7/SP6 ).
质粒提取方法提取载体 质粒(见黄健试验)。然后按下列程序进行连接。 试剂及其制备 T4 DNA连接酶 连接缓冲液(可直接购买或配制)，10X 缓冲液配方为： 0.5 mol/L Tris-HCl pH 7.8 0.1 mol/L MgCl2 50mmol/L 二硫苏糖醇(DTT) ATP 5mmol/L ( 如果直接购买商品缓冲液，有的已加在缓冲液中，但有些需单独加入)。 BSA 0.25mg/L
dH2O至1ml，用无菌石蜡膜堵住杯口，倒转混匀。 4.将两个比色杯置于分光光度计中，调入射光波长，用空白溶液分别调整T至100、OD至0，然后测定样品在260nm、280nm、230nm的OD值。 RNA浓度和纯度分析 浓度计算：对于单链RNA，OD260=1.0时，RNA浓度为40μg/ml，按照上述稀释方式，即OD260=0.1时，其RNA浓度为1μg/ml。 纯度分析：纯净的RNA样品其OD260/OD280的比值应
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