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联硕生物
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文献和实验图谱程序来确定蛋白 N 端或内部的序列。2. 材料 ( 1 ) SDS 抽样缓冲液:0.06 mol/L Tris-HCl ( pH 6.8),2% SDS,10% 甘油,5% 巯基乙醇。 ( 2 ) 分离胶用的丙烯酰胺(丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺= 30:0.135):30.00 g 丙烯酰胺,0.135 g 甲叉双丙烯酰胺(BIS ) 。用 MQ ( Millipore 公司的 MilliQ 净水设备处理过的水)水定容至 100 ml,黑暗中保存(可使用棕色
了一半。刚开始的我不敢向导师提出任何要求,就这样按着老师给的方案(方案是两年前师姐用色氨酸和苏氨酸合成二肽的实验。)开始了,实验方案如下: (1)合成N-Boc-L-Tryptophan色氨酸的合成 在150ml单口瓶中加入2.04g的L-色氨酸,80ml的10%的三乙胺甲醇混合溶液,搅拌溶解。随后加入叔丁氧碳酸酐4.35g,控制温度在55℃以下反应30min。反应完后,有机相减压蒸馏,蒸出大部分的三乙胺甲醇混合溶液。剩余的溶液在冰水浴下用10ml的盐酸酸化至pH=2,再用
Nature 子刊 | IsoNet:基于稳定同位素示踪代谢组学技术开发的新策略
表格 1. 单一/混合标记底物使用浓度计培养基 3. 代谢淬灭与提取 快速移除培养基,用 PBS 洗涤细胞两次。置于干冰上,加入预冷的代谢提取液 (甲醇/水 = 80/20,V/V) 淬灭代谢。 ?80 ℃ 孵育 40 分钟。刮取细胞并转移至离心管,再用 400 μL 提取液清洗培养皿,合并提取液。涡旋 1 分钟,4 ℃、16200 × g 离心 10 分钟,取上清。如测定半胱氨酸等易氧化代谢物,可取部分上清进行 N-乙基马来
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