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999
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联硕生物
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100MG

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文献和实验Agar):取52g麦康凯琼脂加蒸馏水1000ml,微火煮沸至完全浴解,高压灭菌,待冷至60℃左右加入Amp储存液使终浓度为50mg/ml,然后摇匀后涂板。 6、含X-gal和IPTG的筛选培养基:在事先制备好的含50μg/ml Amp的LB平板表面加40ml X-gal储液和4μlIPTG储液,用无菌玻棒将溶液涂匀,置于37℃下放置3-4小时,使培养基表面的液体完全被吸收。 7、感受态细胞制备试剂: 见第三章。 8、煮沸法快速分离质粒试剂: 见第一
10.1 )。 2 . 3 培养基 ( 1 ) MS1 ( 萌发培养基):4.3 g/L MS [ 52 ] 基本培养基和维生素(GIBC0 BRL Rockville,Maryland ) ,30 g/L蔗糖( Sigma,St. Louis,MO, USA ) ,3 g/L phytagel (Sigma), pH 5.6。 ( 2 ) MS2 ( 芽增殖培养基):MS 培养基,30 g/L 蔗糖,500 mg/L 酪蛋白酶水解物 (Sigma
1管XL1-Blue感受态菌解冻,将浓度为2ng/μ1的质粒 DNA4μ1加入到8Oμ1感受态菌中。 3.轻轻摇匀,冰浴30min。 4.42℃热激9O秒,然后迅速冰浴2min。 5.加入LB培养液(无氨苄青霉素)0.8ml,在37℃,100转/min水浴孵育60min。 6.取200μl菌液铺于琼脂板上(涂有X-Gal(20mg/ml)-IPTG(200mg/ml)的LB-氨苄青霉素50mg/ml,1μl/ml培养基),待菌液全部被吸收后,倒置平板
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