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999
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联硕生物
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50ML

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文献和实验/L 磷酸盐缓冲液 (pH 7.4)磷酸氢二钠 (Na2 HPO4,28.4 g/L)440 mL, 磷酸二氢钠 (NaH2PO4·H2O,27.6 g/L)60 mL,调 pH 至 7.4,0.103 MPa 20 min 灭菌或滤菌。1.2.1.3 辅酶-Ⅱ(氧化型) 溶液无菌条件下称取辅酶-Ⅱ,用无菌蒸馏水溶解配制成 0.025mol/L 溶液,现用现配。 1.2.1.4 葡萄糖- 6 -磷酸钠盐溶液称取葡萄糖- 6 磷酸钠盐, 用蒸馏水溶解配制成 0.05 mol/L 溶液,过滤灭菌。现用
(细菌内同源重组AdEasy System)一、目的基因的克隆(以pshuttle-CMV质粒为例)步骤1、选择适当酶切位点,进行酶切连接,将目的片段插入pshuttl-CMV质粒多克隆位点。2、重组质粒鉴定: 酶切鉴定或测序。3、重组质粒扩增,纯化并准备适量含目的基因的穿梭质粒。4、用PmeI单酶切线性化重组穿梭质粒,电泳鉴定质粒完全被切开。5、胶回收线性化质粒,以备共转化使用。二、共转化 1、大肠杆菌BJ5183电转感受态制备 (1)从新鲜琼脂板上挑取单个BJ5183细菌,接种于LB
用PmeI单酶切线性化重组穿梭质粒,电泳鉴定质粒完全被切开。 5. 胶回收线性化质粒,以备共转化使用。 二 共转化 1 大肠杆菌BJ5183电转感受态制备 ² 从新鲜琼脂板上挑取单个BJ5183细菌,接种于LB培养基中,37℃振摇过夜。 ² 接种25ml过夜培养物于500ml LB培养基,37℃振摇,至OD600 达到0.4。 ² 迅速将培养物置于冰浴中30min,至充分冷却。 ²
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