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RT
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见标签
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999
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联硕生物
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50G

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文献和实验,pH 7.0。 ( 16 ) 4 ml Ni-氨基三乙酸(NTA) 柱子:4 ml Ni-NTA 高流速介质(Qiagen)。 ( 17 ) 咪唑缓冲液:50 mmol/L 磷酸钠、0.25 mol/L 咪唑、50 mmol/L NaCl,pH 7.0。 ( 18 ) 磷酸缓冲液:50 mmol/L 磷酸钠、150 mmol/L NaCl,pH 7.2。 ( 19 ) EDTA。 ( 20 ) 1 ml 苯氯仿 HR 5/5 柱子(Amersham
/L 咪唑。 ( 18 ) 高效液相层析(HPLC) 分析用的缓冲液: a. 缓冲液 A:50 mmol/L NH4OAc,pH 5.0。 b. 缓冲液 B:50 mmol/L NH4OAc,pH 5.0 和 50% MeOH。 c. 缓冲液 C:0.1 mol/L 磷酸二氢钠,pH 2.5。 d. 缓冲液 D:0.1 mol/L 磷酸二氢钠,pH 2.5 和 50% MeOH。 ( 19 ) 琼脂糖 DNA 凝胶设备和十二烷基硫酸钠(SDS) 凝胶
数5'-羟基没有参加反应(少于2%),用乙酸酐和1-甲基咪唑终止其后继续发生反应,这种短片段可以在纯化时分离掉。第四步,在氧化剂碘的作用下,亚磷酰形式转变为更稳定的磷酸三酯。经过以上四个步骤,一个脱氧核苷酸被连接到固相载体的核苷酸上。再以三氯乙酸脱去它的5'-羟基上的保护基团DMT,重复以上步骤,直到所有要求合成的碱基被接上去。合成过程中可以观察TCA处理阶段的颜色判定合成效率。通过氨水高温处理,连接在CPG上的引物被切下来,通过OPC, PAGE等手段纯化引物,成品引物用C18浓缩,脱盐,沉淀。沉淀
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