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999
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联硕生物
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250G

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文献和实验ORNL MICROARRAY HYBRIDIZATION PROTOCOLS
Direct labeling of total RNA with Cy3 and Cy5: A. MATERIALS RNeasy® Mini Kit (Qiagen; Cat # 74106) SuperScript II RT (200U/µL) (Life Technologies; Cat # 18064-014) QIAquick PCR Purification Kit (Qiagen; Cat # 28106)
来优化反应结果,,能获得最低的CT值,以及相对于背景来说荧光值有最高的增长。 引物浓度应该在50nM -900nM 范围内进行优化,下面的表格显示了前后引物9种可能浓度 组合的结果 探针浓度应该在50-250nM范围内优化 探针的浓度应该从(50,100,250nM)与9种引物浓度相组合,也既是27种可能根据前面所述的循环参数,在Rotor-Gene上进行试验,选择最小CT值和最高反应扩增的曲线做后续试验。 g) 进一步的提示 通常所用的探针和引物浓度分别为250nM 和900nM
stirrer (see Step 32) Microcentrifuge tubes (1.5 ml and 2.0 ml) Chromatin immunoprecipitations and incubations with Protein A (G) Sepharose (Steps 44-69) are performed in microcentrifuge tubes. These tubes may be siliconized beforehand (e
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