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- 2025年09月29日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 库存：
190
- 灵敏度：
详询
- 样本：
血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本
- 标记物：
hrp辣根过氧化物酶
- 适应物种：
人
- 应用：
科研
- 检测方法：
夹心法
- 检测范围：
详见产品手册
- 规格：
48T/96T
| 规格： | 48T | 产品价格： | ￥870.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 96T | 产品价格： | ￥1270.0 |
英文名称：phosphorylated epidermal growth factor receptor
简称：p-EGFR
单位：ng/mL
准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
有效期：6个月。
使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中磷酸化表皮生长因子受体含量。
实验原理：
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被磷酸化表皮生长因子受体（p-EGFR）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的磷酸化表皮生长因子受体（p-EGFR）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
试剂盒组成：30 倍浓缩洗涤液、酶标试剂、酶标包被板、样品稀释液、显色剂A 液、显色剂 B 液、终止液、标准品、标准品稀释液、产品手册、封板膜、密封袋。
样品收集、处理及保存方法：
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品：
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
操作步骤：
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样，待测样品孔中先加样品稀释液 ，然后再加待测样品（样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂，空白孔除外。
7.温育：操作同 3。
8.洗涤：操作同 5。
9.显色：每孔先加入显色剂A，再加入显色剂B，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟。
10.终止：每孔加终止液，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。
操作注意事项：
1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照产品手册操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4. 严格按照产品手册中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
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文献和实验， 磷酸化蛋白质的量增加通常伴随着非磷酸化蛋白质的降低。如果在蛋白质提取过程中蛋白质有一部分丢失，磷酸化和非磷酸化蛋白质之间的比例则可能被改变，会导致数据偏差。 以下数据使用两种不同的蛋白质提取方法（SD-001，Invent Biotech, USA 基于柱式法的蛋白质提取试剂盒与 RIPA 缓冲液，未公开的数据）比较 p-stat-3 和 p-56 的磷酸化模式，（G.Szanda， NIH.NIAAA / LPS，USA）。结果表明，对于 stat3 的磷酸化模式，处理（T）和基线水平（NT
1 微米后发生了显著变化。表皮生长因子受体 (EGFR) 和 Ras/mTOR 相关蛋白的上调表明 EGFR 介导的途径参与了 BPS 诱导的 MCF-10A 细胞增殖。此外，发现几个增殖相关蛋白标记物升高，如 MKI67 和 CDH1，进一步表明低剂量 BPS 暴露促进增殖。 代谢组分析：35 种内源性代谢物也发生了显著变化。对改变的代谢物和蛋白质的联合途径分析表明了三羧酸 (TCA) 循环、嘌呤代谢、丙酮酸代谢和脂质代谢途径的改变，这些途径涉及维持细胞增殖和细胞信号转导。 6.3、IF 5-10
可将其分成非受体型和膜受体型。 1.非受体型 以src基因产物为代表，此外还有Yes、Fyn、Lck、Fgr、Lyn、Fps/Fes及Ab1等。徐后两者外，其余非受体型蛋白酪氨酸激酶src家族分子理约为60kDa的蛋白质，它们之间除了N末端80个氨基酸组成不同外，其作部分都非常相似。 2.受体型 根据它们的结构不同，受体型酪氨酸激酶可以分为9种类型，其中较常见的有4种类型（图8-5）。 （1）表皮生长因子受体（EGFR）家族：EGF-R家族成员包括EGF-R（分子量为170kDa
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