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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海晅科生物科技有限公司
- 库存:
100
- 灵敏度:
详询
- 样本:
血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本
- 标记物:
hrp辣根过氧化物酶
- 适应物种:
人
- 应用:
科研
- 检测方法:
夹心法
- 检测范围:
详见产品手册
- 规格:
48T/96T
| 规格: | 48T | 产品价格: | ¥800.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 96T | 产品价格: | ¥1200.0 |
英文名称:Anti-immunobulin Binding Protein Antibody
简称:BIP-Ab
单位:ng/mL
准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
贮藏:2-8℃,避光防潮保存。
有效期:6个月。
使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中抗免疫球蛋白结合蛋白抗体含量。
实验原理:
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被抗免疫球蛋白结合蛋白抗体(BIP-Ab)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗免疫球蛋白结合蛋白抗体(BIP-Ab)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
试剂盒组成:30 倍浓缩洗涤液、酶标试剂、酶标包被板、样品稀释液、显色剂A 液、显色剂 B 液、终止液、标准品、标准品稀释液、产品手册、封板膜、密封袋。
样品收集、处理及保存方法:
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品:
1. 酶标仪(450nm)
2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
操作步骤:
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户在小试管中进行稀释。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样,待测样品孔中先加样品稀释液 ,然后再加待测样品(样品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用。
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 5 次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂,空白孔除外。
7.温育:操作同 3。
8.洗涤:操作同 5。
9.显色:每孔先加入显色剂A,再加入显色剂B,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15 分钟。
10.终止:每孔加终止液,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。
操作注意事项:
1. 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照产品手册操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4. 严格按照产品手册中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
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文献和实验,对某些传染病如甲型肝炎有较高的临床诊断价值。 抗原抗体反应 1. 可逆性 抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡,其反应式为: Ag+Ab→Ag·Ab 抗体的亲和力(affinity)是抗原抗体间的固有结合力,可以用平衡常数K表示: K=[Ag·Ab]/[Ag][Ab] Ag·Ab 的解离程度与K值有关。高亲和力抗体的抗原结合点与抗原的决定簇在空间构型上非常适合,两者结合牢固,不易解离。解离后的抗原或抗体均能保持原有的结构和活性,因此可用亲和层析法来提纯抗原或抗体。在抗
,因此其敏感度相对高于间接法。乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法。本法关键在于酶标抗原的制备,应根据抗原结构的不同,寻找合适的标记方法。 3.间接法测抗体 间接法是检测抗体常用的方法。其原理为利用酶标记的抗抗体(抗人免疫球蛋白抗体)以检测与固相抗原结合的受检抗体,故称为间接法。操作步骤如下: 1)将特异性抗原与固相载体联结,形成固相抗原。洗涤除去未结合的抗原及杂质。 2)加稀释的受检血清,保温反应。血清中的特异抗体与固相抗原结合,形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后,固相载体上只留下特异性抗体,血清
表示:K=[Ag•Ab]/[Ag][Ab]。Ag•Ab的解离程度与K值有关。高亲和力抗体的抗原结合点与抗原的决定簇在空间构型上非常适合,两者结合牢固,不易解离。解离后的抗原或抗体均能保持原有的结构和活性,因此可用亲和层析法来提纯抗原或抗体。在抗血清中,特异性的IgG抗体仅占总IgG中的极小部分。用亲和层析法提取的特异性抗体,称为亲和层析纯抗体,应用于免疫测定中可得到更好的效果。 2、最适比例 在恒定量的抗体中加入递增量的抗原形成抗体复合物(沉淀)的量见图1-4.曲线的高峰部分是抗原抗体比例最合适
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