不同富集策略对乙酰化蛋白质检测结果的影响与对比

蛋白质乙酰化（Acetylation）作为真核生物中重要的翻译后修饰之一，广泛参与调控基因表达、代谢稳态、细胞周期等多种生物过程。近年来，随着质谱技术的不断进步，蛋白质乙酰化组学研究逐渐深入。但由于乙酰化修饰通常在低丰度水平发生，直接进行质谱检测常常面临信号被高丰度蛋白掩盖的难题。因此，选择合适的富集策略成为成功解析乙酰化蛋白质图谱的关键一步。

 

一、常见乙酰化富集策略简介

1、抗乙酰化赖氨酸抗体富集

该方法利用对乙酰化赖氨酸特异识别的单克隆或多克隆抗体，对酶解后的肽段进行免疫亲和纯化。

（1）优点

① 操作简便，适用于多种样本类型

② 商业化抗体质量稳定、重复性好

③ 特异性高，适合大规模研究

 

（2）局限性

① 对不同乙酰化位点的识别效率存在差异

② 抗体亲和力影响富集深度

③ 可能存在非特异性结合

 

2、化学标记+亲和纯化策略

该方法通过化学衍生化修饰乙酰化位点，并引入生物素等亲和标签，再利用链霉亲和素磁珠进行捕获。

（1）优点

① 富集特异性较高

② 可用于低起始量样本

③ 对某些新型乙酰化修饰（如N端乙酰化）识别效率更好

 

（2）局限性

① 化学修饰条件苛刻，容易引入背景

② 操作步骤复杂，适用性有限

 

3、串联富集策略

通常结合多种富集技术（如抗体+TiO₂柱或强阳离子交换等）进行串联富集，以提高修饰肽的捕获效率。

（1）优点

① 提升富集深度和覆盖度

② 适合复杂样本或大规模蛋白组分析

 

（2）局限性

① 实验流程长，对样本损耗较大

② 对设备和实验操作要求高

 

二、不同富集策略在质谱检测中的对比分析

为便于理解，以下通过典型实验参数对比三种策略对乙酰化蛋白质检测结果的影响：

 

 

总体来看，对于常规大规模乙酰化组学研究，抗乙酰化抗体富集因其平衡的效率、特异性和操作简便性，仍是主流选择。而对于需要更高覆盖率或特殊修饰位点（如N端乙酰化）分析的研究者，化学标记和串联策略则提供了更灵活的选择。

 

三、如何选择合适的乙酰化富集策略？

不同项目目标和样本特性，决定了富集方法的选择策略：

1、大规模修饰图谱构建：优先考虑高特异性、高重复性的抗体富集法。

2、机制研究（特定位点验证）：可采用化学标记法进行定向分析。

3、组织或临床样本分析：推荐串联富集策略，提高低丰度肽段的检出率。

4、预算有限项目：选择成熟的抗体富集流程 + DDA 模式是性价比zuì yōu方案。

 

四、百泰派克生物科技的优势方案

在百泰派克生物科技，我们针对乙酰化修饰研究提供一站式解决方案，包括：

1、高亲和力抗乙酰化抗体富集平台

2、先进的 Orbitrap Fusion Lumos 与 Exploris 480 质谱系统

3、 基于 Spectronaut 的 DIA 定量分析流程

4、专属生物信息分析团队，助力乙酰化通路与功能挖掘

 

随着表观修饰研究不断深入，对乙酰化蛋白组的精确捕获与分析已成为解析细胞功能网络的核心手段。合理选择并优化富集策略，不仅直接决定质谱检测的质量，更关系到生物学发现的深度与可信度。百泰派克生物科技始终以客户科研需求为中心，结合前沿平台与经验积累，为您的乙酰化蛋白质研究保驾护航。如您有相关项目需求，欢迎随时联系我们获取定制方案！

 

 

 

百泰派克生物科技特色项目

 

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

 

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

 

 

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

 

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

 

 

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

 

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

 

 

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

 

 

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

 

 

百泰派克生物科技七大检测平台

 

 

 

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

4.七大质量控制检测平台，满足您一站式服务需求；

5.服务3000+企业，10000+客户的选择；

6.致力于为您提供优质的生物质谱分析服务!