小鼠皮肤成纤维细胞分离试剂盒

产品描述

小鼠皮肤成纤维细胞(Mouse Dermal Fibroblasts, MDFs)是皮肤真皮层的主要间充质细胞，来源于胚胎中胚层，在维持皮肤结构、修复损伤及调控炎症反应中发挥核心作用。这些细胞具有高度可塑性，能够响应微环境信号(如生长因子、机械应力)改变表型，从静息状态转变为活化的肌成纤维细胞，参与伤口收缩和纤维化过程。原代细胞通常从新生小鼠真皮层分离，需注意避免角质形成细胞或内皮细胞污染。近年来，该类细胞在组织工程(如人工皮肤构建)和基因治疗(如CRISPR编辑矫正ECM缺陷)领域也展现出重要潜力。

适用范围

该试剂盒适用于C57BL/6J、BALB/c等不同品系的小鼠皮肤成纤维细胞提取。

规格

本试剂盒规格为5次(以1只小鼠为1次计)

运输和存储条件

2-8 ℃保存与运输，保质期为参考下表。试剂开封后，有效期为 6-8 周。

配套培养基信息

表1. 分离培养试剂盒组成信息

产品名称	产品规格	储存条件
小鼠皮肤成纤维细胞组织专用消化液I	25 mL	-20°C,避光保存,3个月
小鼠皮肤成纤维细胞组织专用消化液II	10 mL	-20°C,避光保存,3个月
小鼠皮肤成纤维细胞组织处理缓冲液	500ml	2-8°C,避光保存,3 个月
小鼠皮肤成纤维细胞专用培养基	500ml	2-8°C,避光保存,3 个月

 

分离步骤

实验前准备：小鼠皮肤成纤维细胞分离试剂盒(小鼠皮肤成纤维细胞组织专用消化液I、II，小鼠皮肤成纤维细胞组织处理缓冲液、小鼠皮肤成纤维细胞专用培养基);实验需自备手术器械、6孔/6cm培养皿、离心管若干。

一、小鼠皮肤成纤维细胞提取：下面以1只C57BL/6J小鼠为例

D1：

1. 安乐处死新生0~3D小鼠，用剪刀剪去头部、四肢、尾巴。

2. 剥离整个皮肤：首先将锋利的剪刀插入尾部的孔中，然后沿着背部中线剪开身体皮肤到脖子上的开口，接下来，用一个镊子抓住暴露的身体，另一个镊子抓住皮肤，轻轻地将整个皮肤从身体上剥落，并在腿残端上连续移动。

3. 在6cm2培养皿中用组织处理缓冲液漂洗皮肤，重复漂洗3次，将幼鼠的皮肤放入装有冰冷的3~5mL小鼠皮肤成纤维细胞专用消化液I的15mL离心管中，封口后将其置于4℃冰箱中孵育过夜14~18小时。

(注：专用消化液I用量取决于实验者取下的小鼠幼鼠皮肤大小，若皮肤较大，可以剪成两张分为两管进行消化，应尽可能让皮肤在专用消化液I中展开，避免折叠，以达到完全暴露)

D2：

1. 消化14-18小时后，将皮肤与专用消化液I一起转移到培养皿中。将皮肤转移到带有组织处理缓冲液的新培养皿，可洗去多余的专用消化液I

2. 用两把镊子，从组织处理缓冲液中抓住皮肤，提起皮肤，转移到新的培养皿中，表皮面朝下，真皮面朝上，小心地拉伸皮肤褶皱，使其完全伸展在培养皿上

3. 将 1mL 专用消化液II放入新的培养皿中，使用镊子慢慢地向上提起真皮并远离表皮，同时按住表皮。

4. 转移分离得到的真皮，使其漂浮在专用消化液II上，将真皮剪碎成1cm2大小的组织块，37℃下消化15min，每5min反复吹打混匀

5. 在培养皿中加入1mL血清或是含有10%血清的培养基，使用移液器轻轻上下移液几次，以吹散任何细胞团块，将细胞悬液转移至15mL离心管

6. 离心：1000 rpm 离心5分钟

7. 吸出上清液并将细胞沉淀轻轻重悬于1 mL专用培养基中

8. 计数

9. 以 5 x 10⁴ /cm2的密度接种于培养皿中

注意事项

1. 建议全程分离操作过程在冰上进行，可提高细胞活性。

2. 剥离小鼠皮肤时，需将皮肤作为一个完整的部分剥离，注意不要将皮肤分解成碎片，因为这会导致细胞在分散过程中丢失。

3. 小鼠建议使用出生0~3天的乳鼠，长毛的小鼠会增加污染的风险。

4. 若想获得更多细胞，也可尝试将分离后的真皮贴壁等待细胞爬出。

5. 小鼠皮肤成纤维细胞专用消化液、培养基中含有微生物生长所需的营养成分，请在超净工作台内打开，按照所需要量分装，并且用封口膜封住瓶口，即取即用，以避免污染。