小鼠肋骨软骨细胞分离试剂盒

产品描述

软骨组织由软骨细胞、基质及纤维构成。软骨组织再生能力强，这些增生的幼稚细胞形似纤维母细胞，以后逐渐变为软骨母细胞，并形成软骨基质，细胞被埋在软骨陷窝内而变为静止的软骨细胞。根据软骨组织内所含纤维成分的不同，可将软骨分为透明软骨、弹性软骨和纤维软骨三种，其中以透明软骨的分布较广，结构也较典型。软骨细胞位于软骨陷窝内。软骨细胞在软骨组织中负责分泌II型胶原和其它类型的胶原以及非胶原的细胞外基质大分子，其增殖和分化与脊椎动物骨架的发育有着密切的关系，同时能分泌和响应一系列的生长因子，包括IGF-1和IL1。体外培养的小鼠肋骨软骨细胞是研究软骨修复的有用模型，对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。试剂盒采用消化法，使用本试剂盒提取所得的小鼠软骨细胞纯度>90.0%，后续可直接进行RT-qPCR、Western blot等基本生物学实验。

适用范围

该试剂盒适用于不同型号新生小鼠(7天内)肋骨软骨细胞的分离，规格为5T，1T可供4-6只新生小鼠使用。

运输和存储条件

2-8 ℃保存与运输，保质期为参考下表。所有组分开封后，有效期为 6-8 周，建议尽快使用。

配套培养基信息

表1. 试剂盒组成信息

产品名称	产品规格	储存条件
小鼠肋骨软骨细胞消化液I	50 mL	2-8°C 3 个月
小鼠肋骨软骨细胞消化液II	50 mL	2-8°C 3 个月
小鼠肋骨组织处理缓冲液	250 mL	2-8°C 3 个月
小鼠肋骨软骨细胞专用培养基	250 mL	2-8°C 6 个月

 

分离步骤

一、小鼠肋骨软骨细胞分离及培养

实验前准备：小鼠肋骨软骨细胞消化液I、II、小鼠肋骨组织处理缓冲液、小鼠肋骨软骨细胞专用培养基;实验需自备手术器械、40μm 细胞筛、培养皿、巴氏管若干、离心管若干。

1. 将新生鼠麻醉后处死，用酒精喷洒小鼠全身进行消毒，放在培养皿里面，喷洒培养皿放入生物安全柜。

2. 将新生鼠以腹面朝上姿势固定，用无菌剪刀将小鼠皮肤从肚脐位置剪到胸骨，然后沿着肋骨切开。

3. 打开横膈肌，并清除胸腔内的所有软组织(即肺和心脏)。

4. 用无菌剪刀取出肋骨，并用无菌手术刀小心去除肋骨上的软组织，将其放置在小鼠组织清洗液中清洗1-2次。

5. 将肋软骨片放入装有10 mL小鼠软骨细胞消化液I的离心管中，在37℃培养箱消化45 min。

6. 将软骨及消化液I转移至培养皿中，弃消化液I。加入10mL小鼠软骨细胞消化液II，用无菌剪刀将肋骨碎片化后同小鼠软骨细胞消化液II一起转移至离心管内，于37℃培养箱消化过夜(约15个小时)。

7. 过夜消化完毕后，用巴氏管吹打混匀后用40μm细胞筛网过滤，过滤完毕后离心：400 xg，10分钟。

8. 弃上清，用5 mL小鼠软骨细胞专用培养基重悬，再次离心：400 xg，10分钟。

9. 用小鼠软骨细胞专用培养基重悬后计数，即可进行铺板培养。铺板密度见表2。

表2. 小鼠肋骨软骨细胞推荐铺板密度

培养器皿	细胞量（×104个）
10cm培养皿	300
6cm培养皿	150
6孔板	60
12孔板	20
24孔板	10

 

注意事项

1. 组织分离操作建议在冰上操作，组织处理缓冲液建议预冷处理。

2. 分离时应避免过度消化、过度重悬等操作导致细胞损伤。

3. 细胞专用消化液、培养基中含有微生物生长所需的营养成分，请在超净工作台内打开，按照所需要量分装，并且用封口膜封住瓶口，即取即用，以避免污染。