大鼠骨髓干细胞分离试剂盒

产品描述

骨髓干细胞(BMSCs)是一种具有多向分化潜能的干细胞，主要恢复组织细胞的修复功能，促进细胞的再生，有效改善亚健康、早衰等疾病。根据不同来源及分化阶段，干细胞可分为胚胎干细胞和成体干细胞胚胎干细胞具有分化为多种不同组织的能力。成体干细胞因其来源广泛、增殖能力强等特点，现已成为组织工程学研究的种子细胞。其中，骨髓干细胞作为组织工程修复的种子细胞，因其具有来源丰富、取材容易、增殖能力强等优点，正受到越来越多的关注。骨髓干细胞形态类似成纤维细胞，具有较强的增殖能力。在一定的诱导条件下，可分化为脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、心肌细胞、上皮细胞等，具有多向分化潜能。

适用范围

该试剂盒适用于Wistar、SD等不同品系的0-4周大鼠原代骨髓干细胞提取试剂盒。

规格

本试剂盒规格为5次(以10 mL大鼠骨髓干细胞专用解离液为1次计)

运输和存储条件

2-8 ℃保存与运输，保质期为参考下表。所有组分开封后，有效期为 6-8 周，建议尽快使用。

配套培养基信息

表1. 分离培养试剂盒组成信息

产品名称	产品规格	储存条件
大鼠骨髓干细胞专用解离液	50 mL	2-8°C，避光保存， 3 个月
大鼠骨组织处理缓冲液	500 mL	2-8°C，避光保存， 3 个月
大鼠骨髓干细胞消化专用酶	100 mL	2-8°C，避光保存， 3 个月
大鼠骨髓干细胞专用完全培养基	500 mL	2-8°C，避光保存， 3 个月

 

分离步骤

实验前准备：分装好的大鼠骨髓干细胞专用解离液、大鼠骨组织处理缓冲液、大鼠骨髓干细胞专用完全培养基;实验需自备含10%FBS的完全培养基、无菌手术器械、1mL规格的一次性使用无菌注射器、40 μM细胞筛网、培养器皿、离心管若干。

一、骨髓干细胞提取：下面以C57大鼠为例

1. 取1周龄大鼠2只，麻醉处死，75%乙醇浸泡消毒3-5min(3天龄到4周龄均可，推荐周龄小)。

2. 在鼠的腿的位置剪开外皮和内皮，无菌状态下取出双侧股骨和胫骨，浸泡于大鼠骨组织处理缓冲液中，清洗2-3遍。

3. 剔除股骨和胫骨周围的肌肉及结缔组织，用大鼠骨组织处理缓冲液清洗2-3遍。

4. 用无菌剪刀剪去股骨和胫骨的两端，暴露骨髓腔。

5. 用1mL规格的一次性使用无菌注射器吸取分装好的大鼠骨髓干细胞专用解离液，夹起股骨或胫骨，将针头稍微插入一端，将骨髓腔内的骨髓冲至新的培养皿里面。

6. 步骤5重复2-3次，冲洗至骨头发白。

7. 冲洗完毕以后用移液器或巴氏管轻柔吹打，混匀完毕以后过40 μM细胞筛网。

8. 过滤完毕后离心：1000rpm、5min

9. 离心后加入适当大鼠骨髓干细胞专用完全培养基接种于培养基皿中置于37℃，5% CO2，饱和湿度的细胞培养箱中培养。

10. 待细胞贴壁生长24-48h后首次观察、换液。换液时弃去培养基，从而去除未贴壁的细胞。

11. 以后每2天更换一次培养基，细胞汇合达80%-90%时，使用大鼠骨髓干细胞消化专用酶进行消化，按1:2或1:3比例首次传代。注意细胞密度，太密会导致细胞提前分化，整片脱落。

二、骨髓干细胞传代：

1.吸弃原培养液上清。

2.加入2-3 mL PBS润洗细胞，吸弃PBS.

3.加入1-2mL 大鼠骨髓干细胞消化专用酶至培养瓶中，并轻轻晃动培养瓶至消化液浸润所有细胞，放入37℃培养箱消化细胞2-3min。

4.倒置显微镜下观察，待细胞明显变圆有间隙后(全程请不要拍打培养瓶)，再加入3-5ml含10% 血清的培养基终止消化(稀释法终止消化，则培养基用量不应低于5ml)。

5.用巴氏管轻轻吹打混匀、分散细胞，250 xg，离心3-5min。

6.去掉上清，首次传代表按1∶2-1∶3比例传代培养。

注意事项

1. 全程分离操作过程建议在冰上进行，分离骨髓干细胞时应避免过度消化、过度重悬等操作导致细胞损伤。

2. 与股骨和胫骨相黏连的肌肉组织、软骨组织等应尽量去除，避免影响分离出来的骨髓干细胞纯度。

3. 冲洗骨髓腔过程中应保持全程在冰上操作，可一定程度维持骨髓干细胞的活性。

4. 原代分离部分建议全程使用4℃离心机。

5. 大鼠骨髓干细胞组织专用消化液、大鼠骨髓干细胞消化专用酶、大鼠骨髓干细胞专用完全培养基中含有微生物生长所需的营养成分，请在超净工作台内打开，按照所需要量分装，并且用封口膜封住瓶口，即取即用，以避免污染。