cellGrade™premium微孔板

cellGrade™ premium 表面的 BRAND plates®培养板可提高转染细胞增殖量

作者：Martin Liss,Sabine Kraft Neuromuscular &Cardiovascular Cell Biology,Max-Delbrück-Centrum Berlin,Germany

转染被定义为通过几种化学、物理或生物方法将非病毒DNA/基因导入真核细胞。细胞表达的外源标记蛋白是研究目标蛋白功能和定位的有效方法。在正常培养基中，血清中存在的核酸酶会降解DNA,且血清中的其他成分会与核酸形成复合物，从而降低可转染DNA的有效率^「1」。为了避免干扰，使用无血清培养基确保转染的有效性。然而，无血清的培养会降低细胞活力、增殖和附着力。为了部分补偿无血清培养产生的负面影响，因而研发出经特殊修饰的细胞培养面，以支持细胞附着并提高转染后的细胞增殖量。文中我们比较了在洗涤过程中，3种不同表面的微孔板对转染细胞提供的增殖和附着的能力。结果显示，cellGrade™ premium 表面的微孔板与其他制造商的96孔微孔板有着相同的转染细胞数量。

材料与方法

HEK293.EBNA 细胞在含 L-谷氨酰胺、10% 胎牛血清和 100 单位/mL青霉素/链霉素的 DMEM 4.5 g/L 葡萄糖培养基中培养。将细胞接种在类似组织培养表面的底部透明的黑色 96 孔微孔板，并在 37℃、5%CO₂ 条件下培养。24小时后，使用 40kDa 线性聚乙烯亚胺(DNA:PE140比值为1:3)将共计 200 ng/孔的 GFP-编码质粒-DNA pEGFP-C1 用于细胞转染^「2」。72小时后，将培养液更换为PBS。为了不影响细胞生长，37℃条件下用电动多道移液器以最低的排液速度用200 μL PBS将每个微孔板再洗涤2次。采用 TECANInfinite M200 PRO 检测ex485/em535 nm 处的剩余相对荧光单位(RFU)。读板器的检测器依据测量的最高信号强度进行调整。

结果


为确保洗涤过程中相等的吸液强度，使用电动多道移液器进行移液。在这种情况下，唯一的变量便是不同制造商的 TC 培养面。GFP 相对荧光单位的定量结果显示，当洗涤程度与其他制造商的 TC 处理微孔板相同时 cellGradeTM premium 表面的微孔板可促进转染细胞的增殖和 GFP 表达细胞的附着。

结论：当细胞增殖或细胞与培养表面结合性能对于实验至关重要时，cellGradeM premium 表面的BRAND plates®可提供更出色的实验支持。